[發(fā)明專利]一種鯊魚血管生成抑制因子及其生產純化方法和應用無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201010191511.8 | 申請日： | 2010-05-28 |
| 公開（公告）號： | CN101891811A | 公開（公告）日： | 2010-11-24 |
| 發(fā)明（設計）人： | 謝秋玲;梁旭方;陳小佳;洪岸 | 申請（專利權）人： | 暨南大學 |
| 主分類號： | C07K14/475 | 分類號： | C07K14/475;C07K1/22;C12N15/12;C12N15/63;C12N1/21;A61K38/18;A61P35/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102 | 代理人： | 陳衛(wèi) |
| 地址： | 510632 廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 鯊魚 血管 生成 抑制 因子 及其 生產 純化 方法 應用 | ||
1.一種鯊魚血管生成抑制因子，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。
2.編碼權利要求1所述鯊魚血管生成抑制因子氨基酸序列的cDNA，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。
3.一種重組表達載體，其特征在于所述重組表達載體包含權利要求2所述的cDNA序列。
4.一種重組微生物，其特征在于所述重組微生物是由權利要求3所述重組表達載體轉化大腸桿菌感受態(tài)細胞制備而得。
5.權利要求1所述鯊魚血管生成抑制因子的生產純化方法，其特征在于包括如下步驟：
(1)從鯊魚軟骨組織中提取總RNA；
(2)根據現有已知的鯊魚血管生成抑制因子序列的保守區(qū)域設計引物，序列如SEQ?ID?NO：4～9所示；
(3)通過PCR擴增得到鯊魚血管生成抑制因子的基因全長序列；
(4)將所得基因序列克隆至表達載體中，得到重組表達載體；
(5)將重組表達載體轉化感受態(tài)大腸桿菌細胞BL21，挑取單克隆接種到培養(yǎng)基中，擴增培養(yǎng)并誘導表達，離心收取菌體，經破碎、離心后所得沉淀即為包涵體形式的鯊魚血管生成抑制因子；
(6)將包涵體變性、離心、去除雜質，再加入到復性液中，經過攪拌、離心、過濾除雜、Ni?FAST?FLOW親和層析柱純化，得到復性的重組鯊魚血管生成抑制因子。
6.權利要求1所述鯊魚血管生成抑制因子在制備抑制血管生成或生長的藥物中的應用。
7.根據權利要求6所述鯊魚血管生成抑制因子的應用，其特征在于所述抑制血管生成是抑制腫瘤血管生成或生長。
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