[發明專利]抗櫛孔扇貝顆粒血細胞的單克隆抗體及其制備方法

有效

• 申請號: 201010191436.5
• 申請日: 2010-06-03
• 公開（公告）號: CN101863979A
• 公開（公告）日: 2010-10-20
• 發明（設計）人: 邢婧;戰文斌;繩秀珍;林聽聽
• 申請（專利權）人: 中國海洋大學
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N5/20;C12R1/91
• 代理公司: 青島海昊知識產權事務所有限公司 37201
• 代理人: 王鐸

1.一種抗櫛孔扇貝顆粒血細胞的單克隆抗體，其特征在于所述的單克隆抗體是由名稱為：小鼠雜交瘤細胞株6H7，保藏號為：CCTCC?NO：C201042，保藏單位為：中國典型培養物保藏中心，保藏日期為：2010年04月21日的雜交瘤細胞分泌的。

2.一種如權利要求1所述的抗櫛孔扇貝顆粒血細胞單克隆抗體的制備方法，其特征在于所述的方法包括如下步驟：抽取櫛孔扇貝血淋巴經離心得到全血細胞；經介質密度梯度分離法得到櫛孔扇貝顆粒血細胞；以顆粒血細胞為抗原免疫BALB/c小鼠；融合被免疫小鼠的脾細胞和骨髓瘤細胞；經間接免疫熒光法篩選、克隆、進一步篩選得到一株能分泌抗櫛孔扇貝顆粒血細胞單克隆抗體的雜交瘤細胞6H7；其分泌的抗體即為抗顆粒血細胞的單克隆抗體。

3.根據權利要求2所述的抗櫛孔扇貝顆粒血細胞單克隆抗體的制備方法，其特征在于所述的介質密度梯度分離法是Percoll介質梯度離心法：將櫛孔扇貝全血細胞懸液置于不連續Percoll梯度的頂層，離心，自上而下形成的第三層細胞即為顆粒血細胞。

4.根據權利要求2所述的抗櫛孔扇貝顆粒血細胞單克隆抗體的制備方法，其特征在于所述的間接免疫熒光法是將細胞融合后所得的雜交瘤細胞培養上清液與櫛孔扇貝全血細胞懸液或血滴片反應；繼而加入異硫氰熒光素(FITC)標記的羊抗鼠抗體；用熒光顯微鏡在原位的暗視野與明視野下鏡檢，篩選抗顆粒血細胞的單克隆抗體，即單克隆抗體6H7。

5.根據權利要求2所述的抗櫛孔扇貝顆粒血細胞單克隆抗體的制備方法，其特征在于所述的雜交瘤細胞6H7分泌的單克隆抗體經流式免疫熒光法驗證其特性。

6.根據權利要求5所述的抗櫛孔扇貝顆粒血細胞單克隆抗體的制備方法，其特征在于所述的流式免疫熒光法是將單克隆抗體6H7與櫛孔扇貝全血細胞懸液于培養板孔中反應；繼而加入異硫氰熒光素(FITC)標記的羊抗鼠抗體；用流式細胞儀來檢測驗證單克隆抗體6H7所抗的細胞群確為顆粒血細胞群。