[發(fā)明專利]結核桿菌Ag85ab嵌合基因疫苗、其制備方法及應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010191243.X
• 申請日: 2010-06-03
• 公開（公告）號: CN102268446A
• 公開（公告）日: 2011-12-07
• 發(fā)明（設計）人: 李忠明;吳雪瓊;劉慶良;梁艷;張平靜;張俊仙;陽幼榮
• 申請（專利權）人: 上海海規(guī)生物科技有限公司;中國人民解放軍第三○九醫(yī)院
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;A61K48/00;A61K39/39;A61P31/06
• 代理公司: 上海三和萬國知識產(chǎn)權代理事務所 31230
• 代理人: 章鳴玉

技術領域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領域的新型疫苗技術，具體涉及采用嵌合基因技術研制的可用于預防或治療結核病的結核桿菌嵌合基因疫苗，尤其是治療耐藥結核桿菌感染結核病人的嵌合型基因疫苗。

技術背景

迄今已知卡介苗雖能預防兒童結核病，包括嚴重的腦結核和粟粒性結核病，但不能有效地預防成人肺結核病，故美國、加拿大等國一直不常規(guī)接種卡介苗。自上世紀80年代以來，由于結核桿菌耐藥問題越來越嚴重，以及艾滋病、移民和貧困等社會問題使得結核病發(fā)病率在世界范圍內(nèi)重新回升。世界衛(wèi)生組織(WHO)2004年報告全球每年新增結核病人900多萬，每年有200多萬人死于結核病。我國的結核病疫情和耐藥情況也相當嚴重，結核病人數(shù)居世界第二，僅次于印度，每年新發(fā)活動性肺結核病人150多萬人，現(xiàn)有肺結核病人450多萬，每年約13萬人死于此病，為全國各種傳染病之首。耐藥結核病人多，結核分枝桿菌總耐藥率為27.8％，其中初始耐藥率為18.6％，獲得性耐藥率為46.5％，耐多藥率為10.7％。結核病是一種在感染、免疫、預防和治療等方面充滿矛盾和挑戰(zhàn)的慢性傳染病，經(jīng)合理的抗癆藥物治療不耐藥結核菌感染一般在1～2個月內(nèi)即可殺死病灶內(nèi)絕大多數(shù)結核菌，但仍有少量菌殘留，尤其是寄生于巨噬細胞內(nèi)的結核菌不易被殺死，需繼續(xù)治療至少6個月，甚至更長時間。由于耐多藥結核病的流行、化療藥物長期治療產(chǎn)生的毒副作用，以及艾滋病毒的感染、免疫抑制劑的使用和老年結核病等原因?qū)е碌臋C體免疫功能低下，使難治性結核病增多，抗結核治療面臨巨大的挑戰(zhàn)，尤其是耐多藥結核病(MDR-TB)、廣泛耐藥結核病(XDR-TB)面臨無藥可治的困難局面。因此，研制新的抗結核藥物面臨更大的需求。

但是，研制新的抗結核藥物投入大、周期長，而且結核桿菌對新藥也可能很快產(chǎn)生耐藥性，故新的有效抗結核藥物開發(fā)進展緩慢，近年來只開發(fā)了采用免疫調(diào)節(jié)劑來輔助治療結核病的方法。目前用于結核病輔助治療的已獲得批準的細胞免疫調(diào)節(jié)劑產(chǎn)品主要有二類。一類是細胞因子如IFN-γ、IL-2等，其半衰期短，需反復注射，費用高。另一類是用結核分枝桿菌的同類菌制成的非特異性免疫調(diào)節(jié)劑，如(1)母牛分枝桿菌菌苗(商品名微卡菌苗)，系母牛分枝桿菌經(jīng)高溫滅活純化后制成的無細胞免疫調(diào)節(jié)劑，其活性成分主要為細胞壁，還含有蛋白質(zhì)細胞因子誘導物質(zhì)，及具有較強免疫活性的DNA聚合體，能部分增強肺結核患者的細胞免疫功能，與化療聯(lián)用能縮短療程，不良反應少且較輕微，使用安全，復發(fā)率低；(2)草分枝桿菌制劑(商品名烏體林斯utilin’s)，系滅活的草分枝桿菌制成的免疫調(diào)節(jié)劑，可部分提高肺結核患者的細胞免疫功能，促進肺結核病灶的吸收好轉(zhuǎn)；(3)卡介苗多糖核酸注射液(商品名斯奇康)，系采用熱酚法去掉了卡介苗菌體可誘導遲發(fā)型超敏反應的菌體蛋白質(zhì)、再用乙醇沉淀提取的免疫活性較強的菌體脂多糖成分，可部分增強肺結核患者的細胞免疫和體液免疫功能，提高誘生IL-2、IL-2受體表達和IFN-γ的水平，促進細菌陰轉(zhuǎn)和結核病灶的吸收好轉(zhuǎn)而提高聯(lián)合化療的療效。但這三種調(diào)節(jié)劑都是非特異性細胞免疫增強劑，不能誘導針對結核桿菌的特異性強效細胞毒性T淋巴細胞(CTL)應答。

如果能采用疫苗治療結核病，幾個月中只需注射幾針，遠比每天服藥打針方便，且副作用較少費用低，故治療性疫苗已成為重要的研究與開發(fā)方向。