[發明專利]結核桿菌Ag85ab嵌合基因疫苗、其制備方法及應用

有效

• 申請號: 201010191243.X
• 申請日: 2010-06-03
• 公開（公告）號: CN102268446A
• 公開（公告）日: 2011-12-07
• 發明（設計）人: 李忠明;吳雪瓊;劉慶良;梁艷;張平靜;張俊仙;陽幼榮
• 申請（專利權）人: 上海海規生物科技有限公司;中國人民解放軍第三○九醫院
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;A61K48/00;A61K39/39;A61P31/06
• 代理公司: 上海三和萬國知識產權代理事務所 31230
• 代理人: 章鳴玉

1.一種嵌合基因，包含序列1所示編碼結核桿菌蛋白Ag85a的基因和序列2所示編碼結核桿菌Ag85b蛋白125-282位氨基酸序列片段的基因，其中所述編碼Ag85b蛋白125-282位氨基酸序列片段的基因嵌合在Ag85a基因的序列中，嵌合位點為Ag85a基因的第245-250位限制性內切酶Kpn?I識別序列和/或第430-435位內切酶Acc?I識別序列。

2.一種嵌合型結核桿菌基因疫苗，其特征在于：包含權利要求1所述的嵌合基因，所述嵌合基因連接于真核表達載體中。

3.如權利要求2所述的嵌合型結核桿菌基因疫苗，其中所述真核表達載體為JW4303，或pcDNA3.1，或pVAX1系列。

4.如權利要求2所述的嵌合型結核桿菌基因疫苗，其中所述真核表達載體為pVAX1系列。

5.權利要求2所述嵌合型結核桿菌基因疫苗的制備方法，包括以下步驟：

(1)選擇Ag85a基因中的第245-250位Kpn?I酶切位點，或第430-435位Acc?I酶切位點，分別用內切酶Kpn?I或內切酶Acc?I消化真核表達載體中的Ag85a基因，使該表達載體線性化，并用堿性磷酸酶去磷酸化；

(2)分別用帶有內切酶Kpn?I識別序列的引物對，或帶有內切酶AccI識別序列的引物對，通過聚合酶鏈反應擴增編碼Ag85b蛋白125-282位氨基酸序列的DNA片段；

(3)用連接酶分別連接步驟(1)的去磷酸化線性Ag85a基因載體與步驟(2)的編碼Ag85b蛋白125-282位氨基酸序列的DNA擴增片段，獲得含Ag85ab嵌合基因的質粒載體疫苗。

6.權利要求5所述嵌合型結核桿菌基因疫苗的制備方法，其中所述的引物對為序列3所示的引物P1和序列4所示的引物P2。

7.權利要求5所述嵌合型結核桿菌基因疫苗的制備方法，其中所述的引物對為序列6所示的引物P3和序列7所示的引物P4。

8.權利要求2所述嵌合型結核桿菌基因疫苗在制備預防和治療結核病藥物中的應用。

9.如權利要求8所述的應用，其中所述結核病是耐藥結核桿菌感染的結核病。

10.如權利要求8所述的應用，其中所述嵌合型結核桿菌基因疫苗是單獨使用或與抗結核藥物聯用。

11.如權利要求8所述的應用，其中所述嵌合型結核桿菌基因疫苗在應用中可加疫苗佐劑。

12.如權利要求11所述的的應用，其中所述佐劑是左旋咪唑。