[發明專利]雞同源特異性血清和免疫球蛋白的制備與應用

無效

• 申請號: 201010188970.0
• 申請日: 2010-06-02
• 公開（公告）號: CN102268086A
• 公開（公告）日: 2011-12-07
• 發明（設計）人: 曹吉祥
• 申請（專利權）人: 曹吉祥
• 主分類號: C07K16/08
• 分類號: C07K16/08;C07K16/06;A61K39/42;A61P31/12
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技術領域

本發明涉及用于治療、預防肉食雞疾病的特異性血清和免疫球蛋白的制備。利用肉食雞生長周期短，屠宰后血液價格低廉、容易獲得的優勢，將肉食雞作為特異性血清和免疫球蛋白制備的載體，采用特定的免疫程序與方法來制備用于治療、預防肉食雞疾病的特異性血清和免疫球蛋白及其應用。

背景技術

肉食雞疾病比較復雜。在其主要疾病當中，禽流感、新城疫、傳染性法氏囊病、支氣管炎及喉氣管炎等較為嚴重。而目前對這些傳染病的免疫預防還遠未走上正規，各地使用的疫苗五花八門，常因多種原因導致免疫失敗。因此被動免疫如使用免疫血清或免疫球蛋白可以挽回疫苗免疫失敗造成的經濟損失。隨著國內生活水平的提高，肉類制品的消費大量增加，極大帶動了養殖業快速發展。然而，由于各種禽類疾病因素的影響，每年因各種疫病造成的經濟損失占了養殖業總收入的30％以上，嚴重制約了養殖業的正常持續發展。尤其是一些病毒性傳染疾病，發病率高、死亡率大且目前國際上尚無任何特效治療藥物。另一方面，由于抗生素、激素飼料的大量使用，我國雞肉制品藥物殘留嚴重，食品安全亮起紅燈。在雙重壓力下，養殖企業和養殖戶急需有一類能夠替代抗生素施治且能夠滿足食品安全要求、藥效強力而無害無殘留的藥物。采用生物技術途徑生產生物制劑不失為上策。因為生物產品療效高，且采用純物理方法制備，使這種制劑不含任何潛在的污染成分和藥物殘留問題。

由雞蛋中制備特異性的卵黃免疫球蛋白IgY的技術和應用已有多個專利(如：ZL?98117332.2、ZL?99117588.3等)和文獻報道(王婷、宋懷燕等)；以異源生物(豬)為載體制備抗雞主要傳染病的高免血清已獲專利(ZL98113704.0)，以牛為載體制備抗雞禽流感免疫球蛋白的技術已申報專利(ZL200810052660.9)。至今尚無利用肉食雞自身(同源)制備特異性血清和免疫球蛋白用于治療、預防肉食雞疾病的有效方案。

發明內容

為了克服現有技術的不足，而提供一種用于治療、預防肉食雞疾病的特異性血清和免疫球蛋白的制備，適用于工業化生產。

本發明的技術實施方案如下：

1、特異性血清的制備

免疫原的制備：用國家標準病原體毒株接種易感雞胚胎，收獲感染胚液，經提純、濃縮、滅活，加MAC進口佐劑乳化而成制得免疫原，然后按程序單一或聯合免疫健康肉食雞而獲得特異性血清。

肉食雞免疫：皮下多點注射上述制備的特定免疫原(疫苗)，每雞0.5ml。

肉食雞免疫程序：

特異性血清制備：肉食雞屠宰后取血、加入濃度為109mmol/l的枸櫞酸鈉作為抗凝劑、分離血清、冷藏在0℃-10℃的環境中。抗凝劑可以是乙二胺四乙酸鹽或草酸鈉、肝素，但不限于上述抗凝劑。

2、免疫球蛋白的制備

在特異性血清中，經膜分離或放入10％-100％的飽和硫酸銨、鹽析等常規制備工藝，提取特異性免疫球蛋白。

3、病毒滅活

為避免病原體的垂直感染，以上制備的特異性血清和免疫球蛋白要經過病毒滅活。將制備物(血清或球蛋白)置50℃-60℃水浴中溫育10小時滅活可能存在的病毒。經檢測，經過上述滅活處理的制備物主要病原體檢測均為陰性。

4、活性檢測

ELISA間接試驗，操作方法參照常規ELISA間接法，所用抗原、酶標抗體均按棋盤滴定法確定工作濃度。抗原濃度為100μg/ml，被測制備物每孔加樣100μl，辣根過氧化物酶標抗兔抗雞IgG工作稀釋濃度為1∶10000，底物為OPD，2ml/濃硫酸終止反應，酶標儀492nm下測定OD值。經制備物體外瓊脂擴散抗體效價在1∶64以上，紅細胞凝集抑制試驗抗體效價1∶320-1∶1084。

本發明利用肉食雞免疫方法生產特異性血清和免疫球蛋白制成被動免疫制劑，使用后可使肉食雞立即獲得免疫保護能力，具有療效顯著、藥效作用迅速、無毒副作用的特點，藥物制劑容易保存，便于運輸，保質期長，生產工藝簡單，適合于工業化生產。

具體實施方式

下面詳述制備肉食雞疾病的特異性血清和免疫球蛋白及其應用的實施例。

本發明的技術實施方案如下：

1特異性血清的制備

免疫原的制備：用國家標準病原體毒株接種易感雞胚胎，收獲感染胚液，經提純、濃縮、滅活，加MAC進口佐劑乳化而成制得免疫原，然后按程序單一或聯合免疫健康肉食雞而獲得特異性血清。