[發(fā)明專利]雞同源特異性血清和免疫球蛋白的制備與應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010188970.0
• 申請日: 2010-06-02
• 公開（公告）號(hào): CN102268086A
• 公開（公告）日: 2011-12-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曹吉祥
• 申請（專利權(quán)）人: 曹吉祥
• 主分類號(hào): C07K16/08
• 分類號(hào): C07K16/08;C07K16/06;A61K39/42;A61P31/12
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1.雞同源特異性血清和免疫球蛋白的制備與應(yīng)用，其特征在于：(1)特異性血清的制備

1)、免疫原的制備：用國家標(biāo)準(zhǔn)病原體毒株接種易感雞胚胎，收獲感染胚液，經(jīng)提純、濃縮、滅活，加MAC進(jìn)口佐劑乳化而成制得免疫原，然后按程序單一或聯(lián)合免疫健康肉食雞而獲得特異性血清；

2)、肉食雞免疫：皮下多點(diǎn)注射上述制備的特定免疫原(疫苗)，每雞0.5ml；

3)、肉食雞免疫程序：

4)、特異性血清制備：肉食雞屠宰后取血、加入濃度為109mmol/l的枸櫞酸鈉作為抗凝劑、分離血清、冷藏在0℃-10℃的環(huán)境中；

(2)、免疫球蛋白的制備

由特異性血清中，經(jīng)膜分離或放入10％-100％的飽和硫酸銨鹽析等常規(guī)制備工藝，提取特異性免疫球蛋白；

(3)、病毒滅活

為避免病原體的垂直感染，以上制備的特異性血清和免疫球蛋白要經(jīng)過病毒滅活；將制備物(血清或球蛋白)置50-60℃水浴中溫育10小時(shí)滅活可能存在的病毒；經(jīng)檢測，經(jīng)過上述滅活處理的制備物主要病原體檢測均為陰性；

(4)、活性檢測

ELISA間接試驗(yàn)，操作方法參照常規(guī)ELISA間接法，所用抗原、酶標(biāo)抗體均按棋盤滴定法確定工作濃度；抗原濃度為100μg/ml，被測制備物每孔加樣100μl，辣根過氧化物酶標(biāo)抗兔抗雞IgG工作稀釋濃度為1∶10000，底物為OPD，2ml/濃硫酸終止反應(yīng)，酶標(biāo)儀492nm下測定OD值。經(jīng)制備物體外瓊脂擴(kuò)散抗體效價(jià)在1∶64以上，紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)抗體效價(jià)1∶320-1∶1084。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雞同源特異性血清和免疫球蛋白的制備與應(yīng)用，其特征在于：所述的抗凝劑可以為乙二胺四乙酸鹽或草酸鈉、肝素，但不限于上述抗凝劑。