[發明專利]奶牛乳腺腺泡泌乳模型的體外構建方法

無效

• 申請號: 201010187301.1
• 申請日: 2010-05-31
• 公開（公告）號: CN101857852A
• 公開（公告）日: 2010-10-13
• 發明（設計）人: 李慶章;林葉;侯曉明;高學軍
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 金永煥

1.奶牛乳腺腺泡泌乳模型的體外構建方法，其特征在于奶牛乳腺腺泡泌乳模型的體外構建方法按以下步驟實現：一、將基質在4℃條件下融解，然后鋪在4℃預冷的細胞培養板上，每孔基質厚度為0.5mm，再置于37℃細胞培養箱中30～60min，得到基質凝膠的細胞培養板；二、采用質量濃度為0.25%的胰酶和質量濃度為0.02%的EDTA消化原代培養的妊娠４個月的奶牛乳腺上皮細胞5min，然后以1500r/min離心5min，收集細胞；三、將收集到的細胞懸浮于4ml的分析培養基中，制得細胞懸液，然后用分析培養基將細胞懸液稀釋到密度為1×10⁴；四、向基質凝膠的細胞培養板中加入2ml密度為1×10⁴的細胞懸液，置于培養箱中，在溫度為37℃，CO₂的體積濃度為5%的條件下培養15日，即完成奶牛乳腺腺泡泌乳模型的體外構建；其中步驟三中分析培養基由98ml的DMEM/F12基礎培養基、2ml的胎牛血清、10μl濃度為50mg/ml的牛胰島素、20μl濃度為15.15mg/ml的催乳素、60μl濃度為5mg/ml的氫化可的松和100μl的10×雙抗組成，經0.22μm濾膜過濾后，在4℃下儲存。

2.根據權利要求1所述的奶牛乳腺腺泡泌乳模型的體外構建方法，其特征在于步驟一中置于37℃細胞培養箱中40～50min，得到基質凝膠的細胞培養板。

3.根據權利要求1所述的奶牛乳腺腺泡泌乳模型的體外構建方法，其特征在于步驟一中置于37℃細胞培養箱中45min，得到基質凝膠的細胞培養板。