[發(fā)明專利]一種超聲波介導(dǎo)的微生物遺傳轉(zhuǎn)化方法及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010186403.1
• 申請日: 2010-05-31
• 公開（公告）號: CN101875947A
• 公開（公告）日: 2010-11-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 宋厚輝;林璐;黃巍;徐健
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院青島生物能源與過程研究所
• 主分類號: C12N15/87
• 分類號: C12N15/87;C12N13/00;C12R1/01;C12R1/145
• 代理公司: 中科專利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司 11021
• 代理人: 周長興

1.一種低頻超聲波介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化微生物的方法，包括如下主要步驟：

1)在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)菌至對數(shù)期；

2)在含有步驟1中的液體培養(yǎng)基的玻璃瓶中加入待轉(zhuǎn)化的底物；

3)將步驟2中的玻璃瓶放入超聲波儀器的空腔內(nèi)；

4)啟動超聲波儀器，頻率0.1-1000千赫，功率0.01-1000瓦特，采用非探頭式接觸，整個轉(zhuǎn)化過程在生物反應(yīng)器的溶液中進(jìn)行，連續(xù)可調(diào)或間歇式超聲波；

5)細(xì)胞復(fù)蘇、轉(zhuǎn)接、涂平板。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的低頻超聲波介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化微生物的方法，其中，步驟1的細(xì)菌是指40℃-90℃的高溫菌、厭氧菌、革蘭氏染色陽性菌或古菌。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的低頻超聲波介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化微生物的方法，其中，細(xì)菌為：嗜熱厭氧產(chǎn)乙醇桿菌(Thermoanaerobacter?ethanolicus)、布氏嗜熱厭氧菌(Thermoanaerobium?brockii)、木聚糖降解嗜熱菌(Thermoanaerobacterium?xylanolyticum)、麻氏嗜熱厭氧桿菌(Thermoanaerobacterium?mathranii)、厭氧糖化嗜熱桿菌(Thermoanaerobacterium?saccharolyticum)、嗜熱厭氧斜桿菌(Thermoanaerobacter?italicus)魏氏嗜熱厭氧桿菌(Thermoanaerobacterwiegelii)、纖維素降解嗜熱桿菌(Thermoanaerobacter?thermocopriae)、嗜熱解糖梭菌(Clostridium?thermosaccharolyticum)、熱纖梭菌(Clostridiumthermocellum)、高溫溶劑梭菌(Clostridium?straminisolvents)、糞堆梭菌(Clostridium?stercorarium)、嗜熱硫化梭菌(Clostridiumthermohydrosulfricum)、嗜熱丁酸梭菌(Clostridium?thermobutyricum)以及熱解纖維素果汁桿菌Caldicellulosiruptor?kristjanssonii和Caldicellulosiruptor?saccharolyticus，紅球菌(Rhodococcus?sp.)、古細(xì)菌(Archaea)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的低頻超聲波介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化微生物的方法，其中，步驟2加入的待轉(zhuǎn)化的底物為分子量大于100道爾頓的生物大分子。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的低頻超聲波介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化微生物的方法，其中，分子量大于100道爾頓的生物大分子為：DNA、RNA、質(zhì)粒、基因組、蛋白質(zhì)、多糖、脂類、抗生素、納米顆粒中的一種或多種。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的低頻超聲波介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化微生物的方法，其中，步驟3的空腔內(nèi)液體的液面高于玻璃瓶內(nèi)液體的液面。

7.權(quán)利要求1所述的低頻超聲波介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化微生物的方法在微生物遺傳代謝工程中的應(yīng)用，其中頻率為0.1-1000千赫，功率0.01-1000瓦特。