[發(fā)明專利]一種麝香抗炎活性的檢測(cè)方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010185346.5
• 申請(qǐng)日: 2010-05-28
• 公開（公告）號(hào): CN101865914A
• 公開（公告）日: 2010-10-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖小河;金城;羅云;趙艷玲;周健;溫瑞卿
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍第三〇二醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N33/53
• 分類號(hào): G01N33/53;A61K35/55;A61P29/00
• 代理公司: 北京東正專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11312
• 代理人: 劉瑜冬

1.一種麝香抗炎活性的檢測(cè)方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

(1)取麝香提取、提取液配制成不同濃度的溶液為待測(cè)品A；

(2)配制系列濃度的前列腺素(PG)標(biāo)準(zhǔn)品溶液B；

(3)配制系列濃度的的阿司匹林溶液作為陽性對(duì)照品C；

(4)分別配制背景組，環(huán)氧酶II(COX-2)100％初始活性組，陽性對(duì)照組及麝香供試品組4種反應(yīng)體系組；

(5)進(jìn)行環(huán)氧酶II(COX-2)反應(yīng)步驟：即取上述步驟(4)所制得的四組反應(yīng)液，混勻，37℃水浴孵育10～20min；孵育后的四組反應(yīng)液中均加入1份花生四烯酸，混勻，37℃水浴孵育2min；

(6)取步驟(5)中經(jīng)COX-2反應(yīng)的四組反應(yīng)液，加入1M?HCl?50μl，停止水浴，每組均加入與反應(yīng)體系組等體積的飽和S_nCl₂溶液，混勻，室溫放置5min；

(7)將步驟(6)所得的四組反應(yīng)液分別稀釋；

(8)將步驟(7)獲得的一系列前列腺素供試品，采用試劑盒，通過酶免疫法，測(cè)定各組反應(yīng)液吸收度值，并以PG標(biāo)準(zhǔn)品溶液B得到的吸收度標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各組反應(yīng)液中前列腺素的含量，供試品D、E、F、G的前列腺素含量分別為C_D，C_E，C_F，C_G；

(9)根據(jù)供試品D、E、F、G的前列腺素含量分別計(jì)算陽性對(duì)照組抑制率和麝香供試品組抑制率；

(10)根據(jù)(9)步得到的陽性對(duì)照組抑制率和麝香供試品組抑制率，采用“二劑量”法對(duì)麝香供試品組抑制率進(jìn)行可靠性檢驗(yàn)，從而確定麝香抗炎活性效價(jià)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的麝香抗炎活性的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(1)中所用的溶劑為選自水、甲醇、乙醇中的一種或兩種以上的混合物。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的麝香抗炎活性的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(1)中配置不同濃度待測(cè)品A的方法是以20-100倍麝香樣品量的溶劑進(jìn)行分步提取10-60分鐘，濾過，收集濾液；或以20-100倍麝香樣品量的溶劑靜置提取30分鐘后超聲10分鐘。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的麝香抗炎活性的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(1)、(2)、(3)中的待測(cè)品A濃度為大于0％小于100％，前列腺素(PG)標(biāo)準(zhǔn)品溶液B對(duì)數(shù)濃度為3.3、3、2.7、2.4、2.1、1.8、1.5、1.2及陽性對(duì)照品C的濃度為大于0％小于80％。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的麝香抗炎活性的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(4)中4種反應(yīng)體系組的配置方法為：

背景組：反應(yīng)緩沖液+經(jīng)高溫滅活的COX-2+抗氧劑，體積比為97∶1∶1；

COX-2?100％初始活性組：反應(yīng)緩沖液+COX-2+抗氧劑，體積比為97∶1∶1；

陽性對(duì)照組：反應(yīng)緩沖液+COX-2+抗氧劑+陽性對(duì)照C，體積比為95∶1∶1∶2；

麝香供試品組：反應(yīng)緩沖液+COX-2+抗氧劑+待測(cè)品A，體積比為95∶1∶1∶2；

其中，反應(yīng)緩沖液的配制為：Tris-HCl+EDTA+苯酚，并調(diào)節(jié)pH至8.0，質(zhì)量比為1.6∶0.15∶0.02。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的麝香抗炎活性的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(7)中對(duì)4種反應(yīng)體系組的稀釋方法為：背景組以EIA緩沖液稀釋100倍；COX-2?100％初始活性組以EIA緩沖液稀釋1000倍；陽性對(duì)照組以EIA緩沖液稀釋1000倍；麝香供試品組以EIA緩沖液稀釋1000倍；

其中，EIA緩沖液的配制為：磷酸鹽+NaCl+BSA+EDTA+疊氮化鈉，質(zhì)量比為3.4∶23.3∶1.0∶0.3∶0.1。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的麝香抗炎活性的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(9)中的陽性對(duì)照組抑制率計(jì)算方法為麝香供試品組抑制率計(jì)算方法為