[發明專利]一株具有較強有機硒耐受、富集和轉化能力的酵母菌及其應用

有效

• 申請號: 201010185083.8
• 申請日: 2010-05-28
• 公開（公告）號: CN101864369A
• 公開（公告）日: 2010-10-20
• 發明（設計）人: 單寶龍;谷巍;張志焱;楊立華;程秀芳;劉虹
• 申請（專利權）人: 山東寶來利來生物工程股份有限公司
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12R1/72
• 代理公司: 濟南圣達專利商標事務所有限公司 37221
• 代理人: 楊琪

1.一株具有較強有機硒耐受、富集、轉化能力的酵母菌，其特征在于：該菌株命名為產朊假絲酵母(Candida?utilis)CUM，已于2010年04月19日保藏于中國典型培養物保藏中心，其保藏編號為：CCTCC?M?2010090。

2.根據權利要求1所述的具有較強有機硒耐受、富集、轉化能力的酵母菌，其特征在于：所述產朊假絲酵母細胞呈圓形、橢圓形或臘腸形，大小為3.5μm～4.5μm×7.0μm～13.0μm，以多邊出芽方式進行無性繁殖，形成假菌絲；麥芽汁固體培養，菌落呈乳白色，表面光滑濕潤，有光澤或無光澤，邊緣整齊或菌絲狀；化能異養型，能發酵葡萄糖、蔗糖和棉子糖，不發酵半乳糖、麥芽糖、乳糖、蜜二糖；能同化尿素、銨鹽和硝酸鹽，不分解蛋白質和脂肪；兼性厭氧，有氧條件下，進行有氧呼吸；無氧條件下，進行酒精發酵；最適生長溫度30℃，最適生長pH為6.0。

3.權利要求1所述的一株具有較強有機硒耐受、富集、轉化能力的酵母菌在生產制備硒酵母中的應用。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，具體步驟如下：將培養基置于發酵罐中，滅菌，空消：121℃，30min；實消：夾層加溫，115℃，30min，完成實消；待培養基溫度降至30℃時，接種，接種量1％～3％；接種后30℃培養發酵，罐壓0.05MPa，攪拌轉速80rpm，通氣量600m³/h；發酵過程中添加無菌亞硒硝酸鈉溶液；發酵26h；發酵結束后，立即將發酵液離心并用清水清洗，如此反復2～3遍后冷凍干燥，粉碎，即為硒酵母成品；或：發酵結束后，立即噴霧干燥，即得硒酵母成品。

5.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，具體步驟如下：

(1)制備液體種子：采用5000mL三角瓶，培養基裝量1000mL/5000mL三角瓶，115℃滅菌20min，冷卻后接種，接種量1％～3％，在30℃搖床200rpm培養24h即為搖瓶液體種子培養基；

(2)種子罐發酵：采用50L種子罐，培養基裝量為30L；實消溫度115℃，時間30min；待培養基溫度降為30℃時接種，接種量1％～3％，培養溫度28～30℃，罐壓0.05MPa，攪拌轉速80rpm，培養16h，轉入發酵罐培養；

(3)發酵罐培養：采用0.5T發酵罐，培養基裝量為350L；實消溫度115℃，時間30min；待培養基溫度降為30℃時接種，接種量1％～3％，培養溫度28～30℃，罐壓0.05MPa，通氣量600m³/h；發酵過程中添加無菌亞硒硝酸鈉溶液；發酵26h；

(4)發酵結束后，立即將發酵液離心并用清水清洗，如此反復2～3遍后冷凍干燥，粉碎，即為硒酵母成品；或：發酵結束后，立即噴霧干燥，即得硒酵母成品。

6.根據權利要求4或5所述的應用，其特征在于：所述培養基為麥芽汁培養基，其成分為麥芽汁加酵母菌生長的必需營養元素，即：麥芽汁中加入2％葡萄糖、1％NH₄H₂PO₄、0.0001％CaCl₂、0.3％KH₂PO₄、0.0001％MnSO₄、0.1％Na₂HPO₄、0.1％MgSO₄.7H₂O、0.05％蛋白胨、0.0001％FeSO₄、0.0001％ZnSO₄、0.1％泡敵，調pH至6.0；所述百分含量均為質量份數；

所述麥芽汁是通過以下方法配制的：取一份麥芽粉，加5倍重量份水，65℃水浴保溫3～4h，使其自行糖化，直至糖化完全，波美度8.0以上，即得麥芽汁。

7.根據權利要求4或5所述的應用，其特征在于：所述添加的無菌亞硒硝酸鈉溶液中硒的質量分數為10％。

8.根據權利要求4或5所述的應用，其特征在于：所述添加無菌亞硒硝酸鈉溶液的方式為：在酵母菌生物量(鮮)達15％以上時第一次添加硒，添加量為10ppm(以硒計)；第一次添加4h后第二次添加硒，添加量為20ppm(以硒計)；再過4h后第三次添加硒，添加量為100ppm(以硒計)；第三次加硒4h后放罐。

9.根據權利要求4或5所述的應用，其特征在于：所述添加無菌亞硒硝酸鈉溶液的方式為：采用分次流加法，第一次加硒是在發酵后16h，硒添加量為10ppm(以硒計)；第二次加硒在發酵后20h，硒添加量為20ppm(以硒計)；最后一次加硒在發酵后22h，硒添加量為100ppm(以硒計)，發酵26h放罐。