[發明專利]用原核表達系統制備銅綠假單胞菌外膜蛋白OprF的方法無效
| 申請號： | 201010184859.4 | 申請日： | 2010-05-27 |
| 公開（公告）號： | CN101831440A | 公開（公告）日： | 2010-09-15 |
| 發明（設計）人： | 胡成進;王燕 | 申請（專利權）人： | 胡成進 |
| 主分類號： | C12N15/31 | 分類號： | C12N15/31;C12N15/70;C07K14/21 |
| 代理公司： | 濟南泉城專利商標事務所 37218 | 代理人： | 張貴賓 |
| 地址： | 250031 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用原核 表達 系統 制備 銅綠 假單胞菌外 膜蛋白 oprf 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種用原核表達系統制備銅綠假單胞菌外膜蛋白OprF的方法，其特征在于：主要包括如下步驟：
(1)從銅綠假單胞菌中提取基因組DNA，以此為目的基因通過PRC擴增OprF羧基端，并將其克隆至原核表達載體pET28b中，構建重組表達載體pET28b-OprF；
(2)重組質粒經酶切和序列測定后，轉化E.coli?BL21，IPTG誘導表達，進行SDS-PAGE檢測；
(3)經Ni-NTA親和層析柱純化后得到元和表達的OprF蛋白。
2.根據權利要求1所述的用原核表達系統制備銅綠假單胞菌外膜蛋白OprF的方法，其特征在于：所述擴增OprF羧基端采用的引物為上游引物5’-TCGAAGCTTGCTCCGGCTCCGGAAC?CGGTTGCCG?AC-3’(HindIII)和下游引物5’-ACCTCGAGTTCAA?CGCGACGGTT?GA?AGCGCG-3’(XholI)。
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