[發明專利]重組融合蛋白質在快速診斷檢測中的直接應用

無效

• 申請號: 201010184614.1
• 申請日: 2010-05-27
• 公開（公告）號: CN102262158A
• 公開（公告）日: 2011-11-30
• 發明（設計）人: 戴國禎;孫東旭
• 申請（專利權）人: 戴國禎;孫東旭
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;C12N15/62;C12N15/63;C07K19/00
• 代理公司: 徐州市淮海專利事務所 32205
• 代理人: 華德明

1.一種直接應用重組融合蛋白質進行分析物快速檢測的方法，其特征在于：

(1)構建融合蛋白質編碼基因：將編碼用于捕獲和檢測分析物的蛋白質編碼序列、短小多肽標簽和較大融合蛋白質DNA序列用重組DNA技術構建到一起，形成攜帶雙重標簽(短小多肽標簽和較大融合蛋白質標簽)的融合基因，克隆到表達載體。

(2)制備融合蛋白質：根據表達載體特點，誘導表達產生重組融合蛋白質。用針對短小多肽標簽和較大融合蛋白質的親和層析材料純化重組融合蛋白質。

(3)制備檢測信號試劑：用生物素標記融合蛋白質，用膠體金標記能夠特異識別生物素的蛋白質，共同組成檢測信號試劑；或者采用膠體金標記融合蛋白質，作為檢測信號試劑。

(4)制備快速檢測測試條：直接用未標記的融合蛋白質在反應平面介質上點印形成檢測線；用能夠與檢測信號試劑特異結合的試劑在同一反應平面介質上點印形成質量控制線。根據檢測信號試劑的不同，點印質控線的試劑可以是用生物素標記的常用蛋白質例如BSA，也可以是針對檢測試劑的抗體。

(5)組裝快速檢測裝置：將上述檢測信號試劑、快速檢測測試條、吸水紙、支持平板和塑料外殼等組裝產生快速檢測裝置。

(6)檢測：加入待測樣本，根據檢測線和質控線的反應，確定檢測結果。

2.根據權利要求1所述的快速檢測方法，其特征在于，其中所說的分析物是能夠與所說的融合蛋白質特異結合的測試目的分子，主要包括但不限于人體及其他動物的抗體、抗體片段、其他蛋白質、肽、寡聚核苷酸適體、其他類型生物大分子及其復合物、以及亞細胞結構等。如果所說的分析物是抗體，則所說的融合蛋白質是能夠與該抗體結合的抗原蛋白質或其片段(結構域)。

3.根據權利要求1和2所述的快速檢測方法，其特征在于，其中所說的較大融合蛋白質是指任何與抗原基因融合并表達產生重組融合蛋白質后，能夠提高原有抗原蛋白質水溶性、或提高抗原蛋白質表達量、或提高信號分子(生物素、膠體金、酶等等)標記效率的30個氨基酸殘基以上的多肽序列。較大融合蛋白質包括但不限于任何來源的MBP和GST或其片段。一個重組融合蛋白質可以含有一個或若干個相同或不同的較大融合蛋白質。

4.根據權利要求1和2所述的快速檢測方法，其特征在于，其中所說的短小多肽標簽是指攜帶一定特異性結合功能的長度為4-30個氨基酸殘基的多肽序列，包括但不限于His-tag、FLAG-tag、Strep-tag，等等。

5.根據權利要求1和2所述的快速檢測方法，其特征在于，其中所說的融合蛋白質至少應用于所說的檢測試劑或者在反應平面介質上點印形成檢測線，或者同時應用于檢測試劑和點印檢測線。同時應用于檢測試劑和點印檢測線時，所用的融合蛋白質可以相同，也可以有所不同。

6.根據權利要求1和2所述的快速檢測方法，其特征在于，其中所說的能夠特異識別生物素的蛋白質包括任何能夠特異性識別并結合生物素的任何來源的蛋白質，包括但不限于親和素、鏈親和素、中性親和素、抗生物素抗體、這些蛋白質的突變體或修飾變異體以及其功能片段等。

7.據權利要求1和2所述的快速檢測方法，其特征在于，其中所說的用于制備快速檢測測試條的反應平面介質是能夠固相結合蛋白質而形成檢測線和質量控制線，并且允許液相樣本擴散流動的薄層平面物質，包括但不限于硝酸纖維膜、尼龍膜、經過特殊處理的塑料表面或玻璃表面，等等。

8.權利要求1和2所述的快速檢測方法，在臨床檢測診斷、流行病調查、生物標記鑒定分析、分子生物學和細胞生物學研究、蛋白質組學研究分析、新藥靶位鑒定分析、臨床藥物動力學和藥效學分析、畜牧獸醫、農業病害診斷分析等領域的應用。

9.基于權利要求1和2所述直接應用重組融合蛋白質快速檢測方法研制組裝的快速檢測裝置及試劑，用于權利要求8所述的應用領域。其中所說的快速檢測裝置及試劑包括組裝完整的快速檢測裝置及其組成部分，包括檢測試劑、點印有檢測線和質量控制線的快速檢測測試條、吸水紙、塑料支持墊板、塑料外殼裝置、用法說明等。等等。如果信號分子是酶，快速檢測裝置中還包括但不限于酶底物溶液和反應終止液。