[發明專利]一種多重連接與延伸依賴的探針擴增方法及其試劑盒

無效

• 申請號: 201010183920.3
• 申請日: 2010-05-25
• 公開（公告）號: CN101845502A
• 公開（公告）日: 2010-09-29
• 發明（設計）人: 陶炯;孫維;陳煒;周華
• 申請（專利權）人: 上海交通大學醫學院附屬新華醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 薛琦

1.一種多重連接與延伸依賴的探針擴增方法，其特征在于，所述的方法包括如下步驟：

(1)DNA靶序列變性并與MLEPA探針進行雜交；

(2)延伸與連接反應；

(3)PCR反應；

(4)PCR產物通過毛細管電泳分離；

(5)電泳結果進行數據處理；

所述的延伸與連接反應是同時使用DNA多聚酶與連接酶的延伸與連接反應。

2.根據權利要求1所述的方法，方法步驟(1)中所述的MLEPA探針是根據DNA靶序列設計的寡核苷酸左探針和寡核苷酸右探針，左探針的5’端為通用引物X區，3’端為其與靶序列的雜交區，右探針的5’端為其與靶序列的雜交區，3’端為通用引物Y的互補區，其特征在于，寡核苷酸左探針和寡核苷酸右探針的雜交區在DNA靶序列上有一段間隔序列，若待檢位點為具有長度多態性的DNA位點，則將具有長度多態性的DNA序列置于該間隔序列中，通過后續的反應檢測該間隔序列中的待檢位點的重復情況與長度多態性，若待檢位點為保守DNA位點，則通過間隔序列的長度調整調節最終PCR產物長度并通過后續電泳檢驗相應位點。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述的待檢DNA位點可以是具有長度多態性的STR位點。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述的待檢DNA位點也可為不具長度多態性的保守DNA位點。

5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述的STR位點選擇是D5S112、D5S435、D5S557、D5S351和D5S610。

6.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述的保守DNA位點選擇是AR基因，SRY基因和BRCA2基因。

7.一種能夠同時擴增與檢測多個位點試劑盒，包括寡核苷酸左探針、寡核苷酸右探針、DNA多聚酶、連接酶，其特征在于，所述的試劑盒還包括多重連接與延伸依賴探針擴增方法的探針組，所述的探針組中至少有兩對根據待檢位點設計的探針。