[發(fā)明專利]基于綠色熒光蛋白和紅色熒光蛋白的雙熒光共定位系統(tǒng)

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010183669.0
• 申請(qǐng)日: 2010-05-25
• 公開（公告）號(hào): CN101863983A
• 公開（公告）日: 2010-10-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林堅(jiān);夏斌;周軍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K19/00
• 分類號(hào): C07K19/00;C12N15/62;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;C12Q1/02;G01N21/64
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

1.一種用于檢測待測蛋白是否相互作用的融合蛋白組，為如下1)和2)：

1)由熒光蛋白A、待測蛋白A和核輸出信號(hào)組成的融合蛋白；

2)由熒光蛋白B、待測蛋白B和核定位信號(hào)組成的融合蛋白；

所述熒光蛋白A與所述熒光蛋白B為發(fā)不同顏色熒光的熒光蛋白；

所述1)所示融合蛋白與2)所示融合蛋白分別獨(dú)立包裝；

所述待測蛋白A和待測蛋白B是待檢測是否相互作用的兩個(gè)蛋白。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的融合蛋白組，其特征在于：所述1)所示融合蛋白中，熒光蛋白A、待測蛋白A和核輸出信號(hào)順次連接；

所述2)所示融合蛋白中，待測蛋白B、核定位信號(hào)和熒光蛋白B順次連接。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的融合蛋白組，其特征在于：所述熒光蛋白A為紅色熒光蛋白或綠色熒光蛋白；所述熒光蛋白B為紅色熒光蛋白或綠色熒光蛋白。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的融合蛋白組，其特征在于：所述綠色熒光蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1所示；所述紅色熒光蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：3所示；所述核輸出信號(hào)的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：5所示；所述核定位信號(hào)的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：7所示。

5.權(quán)利要求1-4中任一所述1)所示融合蛋白的編碼基因；權(quán)利要求1-4中任一所述2)所示融合蛋白的編碼基因。

6.如下Ⅰ、Ⅱ或Ⅲ所示的重組表達(dá)載體、重組菌、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或表達(dá)盒：

Ⅰ、含有權(quán)利要求1-4中任一所述1)所示融合蛋白的編碼基因的重組表達(dá)載體、重組菌、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或表達(dá)盒；

Ⅱ、含有權(quán)利要求1-4中任一所述2)所示融合蛋白的編碼基因的重組表達(dá)載體、重組菌、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或表達(dá)盒；

Ⅲ、含有權(quán)利要求1-4中任一所述1)所示融合蛋白的編碼基因和權(quán)利要求1-4中任一所述2)所示融合蛋白的編碼基因的重組表達(dá)載體、重組菌、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或表達(dá)盒。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的重組表達(dá)載體、重組菌、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或表達(dá)盒，其特征在于：

所述Ⅰ中所述重組表達(dá)載體為如下a所示；

所述Ⅱ中所述重組表達(dá)載體為如下b所示；

所述Ⅲ中所述轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系是將a所示重組表達(dá)載體和b所示重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞得到的；

a、按照如下方法得到的重組表達(dá)載體：在載體pmWasabi-C的多克隆位點(diǎn)間插入所述核輸出信號(hào)的編碼基因和待測蛋白A的編碼基因，使綠色熒光蛋白的編碼基因、待測蛋白A的編碼基因和核輸出信號(hào)的編碼基因順次連接為融合基因；

b、按照如下方法得到的重組表達(dá)載體：在載體pDsRed1-N1的多克隆位點(diǎn)間插入所述核定位信號(hào)的編碼基因和待測蛋白B的編碼基因，使待測蛋白B的編碼基因、核定位信號(hào)的編碼基因和紅色熒光蛋白的編碼基因順次連接為融合基因。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系，其特征在于：所述宿主細(xì)胞為Hela細(xì)胞系。

9.如下物質(zhì)中的至少一種在檢測蛋白是否相互作用中的應(yīng)用：1)權(quán)利要求1-4中任一所述的融合蛋白組，2)權(quán)利要求5所述編碼基因，3)權(quán)利要求6-8中Ⅲ所述重組表達(dá)載體，4)權(quán)利要求6-8中Ⅲ所述重組菌，5)權(quán)利要求6-8中Ⅲ所述轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系。

10.一種檢測蛋白是否相互作用的方法，包括如下步驟：檢測權(quán)利要求6-8中Ⅲ所述轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系的熒光發(fā)光情況，根據(jù)檢測結(jié)果判別待測蛋白是否相互作用；

所述根據(jù)檢測結(jié)果判別待測蛋白是否相互作用的方法如下：

若所述轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系中細(xì)胞核中同時(shí)具有兩種顏色熒光，則所述待測蛋白相互作用，

若所述轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系中細(xì)胞核中具有一種顏色熒光，而細(xì)胞質(zhì)中具有另一個(gè)種顏色熒光，則所述待測蛋白不能相互作用。