[發明專利]一種檢測常見耳聾突變基因的方法無效
| 申請號： | 201010183359.9 | 申請日： | 2010-05-26 |
| 公開（公告）號： | CN102260732A | 公開（公告）日： | 2011-11-30 |
| 發明（設計）人： | 馮永;鄔玲仟 | 申請（專利權）人： | 湖南家輝生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 長沙正奇專利事務所有限責任公司 43113 | 代理人： | 盧宏 |
| 地址： | 410006 湖南*** | 國省代碼： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 檢測 常見 耳聾 突變 基因 方法 | ||
【權利要求書】：
1.檢測GJB2、SLC?26A4、線粒體基因A1555G和C?1494T突變的方法包括如下步驟：
(1)根據GJB2、SLC?26A4、線粒體基因A1555G和C?1494T突變位點的DNA序列，設計相應的引物；
(2)采樣后提取樣品中的用多重PCR擴增三個耳聾基因的三個片段；
(3)PAGE膠或瓊脂糖膠檢測，當目的片段產量和特異性都很好時，可行酶切；分別用限制性內切酶Apal、ECO521和Alw261酶切步驟(2)中的三個片段；
(4)酶切產物再次PAGE膠檢測；
其中多重PCR擴增的步驟和條件是：
①模板DNA的變性：模板DNA經加熱至95℃左右5分鐘后，使模板DNA雙鏈解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；
②模板DNA與引物的退火(復性)：模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至61℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合；
③引物的延伸：DNA模板--引物結合物在70℃條件下在DNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈重復循環變性--退火--延伸三過程，就可獲得更多的“半保留復制鏈”。
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