[發明專利]蛋白酶激活受體激動劑的制備方法及其用途

無效

• 申請號: 201010183337.2
• 申請日: 2010-05-26
• 公開（公告）號: CN101870974A
• 公開（公告）日: 2010-10-27
• 發明（設計）人: 張云;張勇;李文輝;余果宇;江萍;王嚴戒
• 申請（專利權）人: 中國科學院昆明動物研究所
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/70;C07K7/06;C12Q1/68;G01N33/53;G01N21/64;A61K38/08;A61P17/02;A61P35/00;A61P7/04
• 代理公司: 昆明祥和知識產權代理有限公司 53114
• 代理人: 孟蓉英

1.一種蛋白酶激活受體激動劑的制備方法，其特征在于包括：1)該激動劑是兩棲類物種大蹼鈴蟾的三葉因子Bm-TFF2、人三葉因子2；2)利用PCR技術獲取所需的Bm-TFF2或人三葉因子2基因全序列并將它們分別插入原核表達載體pET-32a(+)中；3)在大腸桿菌原核表達系統中高效表達了Bm-TFF2以及人三葉因子2；4)通過對表達菌株裂解液親和層析得到可溶性融合蛋白TRX-Bm-TFF2以及人三葉因子2；5)融合蛋白經第X因子蛋白酶酶切后再經鎳親和柱純化，得到純化的Bm-TFF2以及人三葉因子2。

2.一種蛋白酶激活受體激動劑的用途，其特征在于：蛋白酶激活受體激動劑Bm-TFF2作為蛋白酶激活受體1、蛋白酶激活受體2和蛋白酶激活受體4的激動劑在蛋白酶激活受體檢測試劑和制藥中的應用。

3.一種蛋白酶激活受體激動劑的用途，其特征在于：所述的蛋白酶激活受體4作為胃癌檢驗診斷標志物在臨床診斷試劑中的應用。

4.一種蛋白酶激活受體激動劑的用途，其特征在于：所述蛋白酶激活受體激動劑中的人三葉因子2作為蛋白酶激活受體4的激動劑在細胞遷移及創傷修復中的應用。

5.一種蛋白酶激活受體激動劑的用途，其特征在于：所述蛋白酶激活受體激動劑中的人三葉因子蛋白2和蛋白酶激活受體4作為臨床腸癌檢驗診斷標志物在臨床診斷試劑中的應用。

6.如權利要求2、3、4或5所述的蛋白酶激活受體激動劑的用途，其特征在于：所述的Bm-TFF2和哺乳類三葉因子2的衍生序列，其結構如下所示：

Seq?Nol.Gly?Phe?Pro?Ile?Tyr?Glu

Seq?No2.Ser?Phe?Ile?Ser?Ala?Arg?Arg?Asn

Seq?No3.Ser?Phe?Lys?Leu?Lys?Glu

Seq?No4.Ser?Phe?Lys?Pro?Gln?Glu

Seq?No5.Gly?Phe?Pro?Gly?Ile?Thr

Seq?No6.Gly?Tyr?Pro?Gly?Ile?Ser

Seq?No7.Gly?Phe?Pro?Gly?Val?Thr

Seq?No8.Gly?Tyr?Pro?His?Val?Thr。

7.根據權利要求6所述的蛋白酶激活受體激動劑的用途，其特征在于：所述的Bm-TFF2和哺乳類三葉因子2的衍生序列作為蛋白酶激活受體的新型配體，在生物醫學試劑制備和制藥中的應用。