[發明專利]高效液相色譜串聯質譜測蜂王漿中硝基咪唑類殘留的方法

有效

• 申請號: 201010181359.5
• 申請日: 2010-05-24
• 公開（公告）號: CN101865887A
• 公開（公告）日: 2010-10-20
• 發明（設計）人: 周萍;錢志來;陳建清;毛增亮
• 申請（專利權）人: 杭州蜂之語蜂業股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/14;G01N30/36
• 代理公司: 杭州天欣專利事務所 33209
• 代理人: 陳紅

技術領域

本發明涉及一種測蜂王漿中硝基咪唑類殘留的方法，尤其是涉及一種高效液相色譜串聯質譜測蜂王漿中硝基咪唑類殘留的方法，通過高效液相色譜串聯質譜來測定蜂王漿中硝基咪唑類藥物的殘留量，最主要用于測定蜂王漿中甲硝唑、洛硝噠唑和二甲硝咪唑的殘留量。

背景技術

硝基咪唑類藥物(Nitroimidazles)的化學結構特點是分子中含有一個第五位接有硝基的咪唑環，硝基咪唑類藥物具有廣譜抗菌和抗原蟲作用，是臨床常見藥物。

液相色譜-串聯質譜方法作為確證方法已經廣泛被國內外政府監督檢驗機構運用，液相色譜-串聯質譜方法在靈敏度、準確度、檢測效率上的獨特優勢，已成為目前最優越的殘留檢測儀器設備。但是，由于蜂王漿的基質復雜，樣品凈化困難，導致采用液相色譜-串聯質譜方法來測定蜂王漿中硝基咪唑類藥物的準確性不高，如GB/T?23407-2009是代表我國蜂王漿中硝基咪唑類藥物檢測技術最先進水平的檢測標準，在GB/T?23407-2009中蜂王漿中硝基咪唑類藥物及其代謝物殘留量的測定就是使用液相色譜-質譜/質譜法，但是采用GB/T?23407-2009測定方法的檢測限為2.0μg/kg。

目前，歐盟要求動物源性食品中藥物殘留不得檢出，即在檢測方法的檢出限以下，歐盟對蜂王漿凍干粉中硝基咪唑類藥物的檢測限已經達到了2.5μg/kg，對蜂王漿中硝基咪唑類藥物的檢測限則已經達到了0.5μg/kg，如此以來，我國GB/T?23407-2009中的標準方法已不能滿足要求，其他同類文獻報道的方法也遠遠達不到上述檢測限的要求，如由丁濤、徐錦忠、沈崇鈺等發表在色譜2006年第24卷第4期第331-334頁中的高效液相色譜-串聯質譜聯用測定蜂王漿中的三種硝基咪唑類殘留也達不到上述檢測限的要求。而且，由于蜂產品的樣品基質成分復雜，為了減少基質效應，很多液相色譜-質譜/質譜法中都采用了固相萃取技術，如GB/T?23407-2009中蜂王漿中硝基咪唑類藥物及其代謝物殘留量的測定方法、SN/T?1928-2007進出口動物源性食品中硝基咪唑殘留量檢測方法、農業部1025號公告-22-2008動物源食品中4種硝基咪唑殘留檢測法以及由殷居易、謝東華、李佐卿等發表在分析測試學報年2007年第26卷第13期第385-388頁中的HPLC-APCI(+)MS/MS分析動物源性食品中的硝基咪唑類藥物殘留量的方法中均采用了固相萃取技術，從而提高了檢測成本。

綜上所述，目前還沒有一種方法簡單，試劑用量少，檢測成本低，檢測的效率高、準確性好、靈敏度高的高效液相色譜串聯質譜測蜂王漿中硝基咪唑類殘留的方法。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術中存在的上述不足，而提供一種方法簡單，試劑用量少，檢測成本低，檢測快速、靈敏、準確的高效液相色譜串聯質譜測蜂王漿中硝基咪唑類殘留的方法。

本發明解決上述問題所采用的技術方案是：該高效液相色譜串聯質譜測蜂王漿中硝基咪唑類殘留的方法的特點在于：該方法所用到的原料包括純度＞99.4％的甲硝唑，純度＞99.0％的洛硝噠唑，純度＞98.5％的二甲硝咪唑，純度＞98％的D3-二甲硝咪唑，為農殘級的乙酸乙酯，為分析純的氫氧化鈉和氯化鈉，為優級純的正己烷，為液相色譜純的乙腈、乙酸銨和甲酸，水，初始流動相；所述初始流動相中的有機相為乙腈，水相中含有體積濃度為0.1％的甲酸和濃度為0.5mmol/L的乙酸銨，所述有機相與水相的體積比為3∶97；

該方法所用到的設備包括三重四極桿串聯質譜儀，配有二元泵、在線脫氣機、自動進樣器、數據處理軟件的高效液相色譜儀；所述三重四極桿串聯質譜儀中的離子源溫度為550℃，輔助加熱氣為65.00psi，干燥氣為65.00psi，氣簾氣為10.00psi，碰撞氣為5.00psi，電噴霧電壓為4000.00V，離子化法為正離子模式；所述高效液相色譜儀為Agilent?1200series，色譜柱為Intersil?ODS?C8-3，色譜柱的規格為2.1×150mm，3μm，進樣量為20μl；