[發明專利]高效液相色譜串聯質譜測蜂王漿中硝基咪唑類殘留的方法

有效

• 申請號: 201010181359.5
• 申請日: 2010-05-24
• 公開（公告）號: CN101865887A
• 公開（公告）日: 2010-10-20
• 發明（設計）人: 周萍;錢志來;陳建清;毛增亮
• 申請（專利權）人: 杭州蜂之語蜂業股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/14;G01N30/36
• 代理公司: 杭州天欣專利事務所 33209
• 代理人: 陳紅

1.一種高效液相色譜串聯質譜測蜂王漿中硝基咪唑類殘留的方法，其特征在于：該方法所用到的原料包括純度＞99.4％的甲硝唑，純度＞99.0％的洛硝噠唑，純度＞98.5％的二甲硝咪唑，純度＞98％的D3-二甲硝咪唑，為農殘級的乙酸乙酯，為分析純的氫氧化鈉和氯化鈉，為優級純的正己烷，為液相色譜純的乙腈、乙酸銨和甲酸，水，初始流動相；所述初始流動相中的有機相為乙腈，水相中含有體積濃度為0.1％的甲酸和濃度為0.5mmol/L的乙酸銨，所述有機相與水相的體積比為3∶97；

該方法所用到的設備包括三重四極桿串聯質譜儀，配有二元泵、在線脫氣機、自動進樣器、數據處理軟件的高效液相色譜儀；所述三重四極桿串聯質譜儀中的離子源溫度為550℃，輔助加熱氣為65.00psi，干燥氣為65.00psi，氣簾氣為10.00psi，碰撞氣為5.00psi，電噴霧電壓為4000.00V，離子化法為正離子模式；所述高效液相色譜儀為Agilent?1200series，色譜柱為Intersil?ODS?C8-3，色譜柱的規格為2.1×150mm，3μm，進樣量為20μl；

該方法包括標準溶液制備工序、蜂王漿樣品處理工序、標準曲線制作工序和蜂王漿樣品檢測工序；所述標準溶液制備工序如下：a、混合貯備標準液配制步驟：稱取10mg甲硝唑、10mg洛硝噠唑和10mg二甲硝咪唑均置于10ml容量瓶中，并用乙腈定容至10ml配制成濃度為1000mg/L的混合貯備標準液；b、混合中間標準液配制步驟：取a中的混合貯備標準液100μl置于10ml容量瓶中，并用乙腈定容至10ml配制成濃度為10mg/L的混合中間標準液；c、二甲硝咪唑氘代內標配制步驟：稱取D3-二甲硝咪唑10mg用乙腈配制成濃度為10mg/L的二甲硝咪唑氘代內標中間溶液；d、臨時標準使用液配制步驟：取b步驟中的混合中間標準液分別用水配制成濃度為200μg/kg的一號臨時標準使用液、濃度為20μg/kg的二號臨時標準使用液和濃度為10μg/kg的三號臨時標準使用液，取c步驟中的二甲硝咪唑氘代內標中間溶液用水配制成濃度為100μg/kg的二甲硝咪唑氘代內標臨時使用液；

所述蜂王漿樣品處理工序如下：a、稱取蜂王漿樣品10g加入10ml水并混合均勻而制得蜂王漿樣品液；b、將a中的蜂王漿樣品液置于一號50ml離心塑料瓶中，再向一號50ml離心塑料瓶中加入濃度為100μg/kg的二甲硝咪唑氘代內標臨時使用液100ul并混合充分，然后靜置5min以上；再向一號50ml離心塑料瓶中加入30ml體積濃度為2％的HClO₄混合均勻并提取5min，然后將位于一號50ml離心塑料瓶中的液體在常溫下超聲破乳1-2min，再用體積濃度為2％的HClO₄定容至50ml而制得蜂王漿混合液；將蜂王漿混合液置于30℃下進行超聲提取20min，然后在轉速為3000rpm下離心5min而得到上清液；取上清液20ml置于二號50ml離心塑料瓶中，并用濃度為1mol/L的NaOH溶液將上清液的pH值調節到8.8，然后向二號50ml離心塑料瓶中加入2.0g氯化鈉，待氯化鈉溶解后再加入10ml乙酸乙酯并充分混合3min后，在轉速為3000rpm下離心2min而得到乙酸乙酯層，將乙酸乙酯層置于15ml塑料離心管中并在35℃下進行氮氣吹干，然后向15ml塑料離心管中加入1ml初始流動相并進行超聲溶解，再向15ml塑料離心管中加入2ml正己烷并用力振搖充分混合去脂，然后在轉速為800rpm下離心2min而得到下層樣液，將下層樣液過0.22μm濾膜而制得上機檢測樣液；

所述標準曲線制作工序中，先稱取6份重量均為10.0g的陰性蜂王漿樣品分別置于一號試劑瓶、二號試劑瓶、三號試劑瓶、四號試劑瓶、五號試劑瓶和六號試劑瓶中；然后向一號試劑瓶中加入10ml水并混合均勻而制得一號陰性蜂王漿液，向二號試劑瓶中加入100μl濃度為10μg/kg的三號臨時標準使用液和10ml水并混合均勻而制得二號陰性蜂王漿液，向三號試劑瓶中加入500μl濃度為10μg/kg的三號臨時標準使用液和10ml水并混合均勻而制得三號陰性蜂王漿液，向四號試劑瓶中加入1000μl濃度為20μg/kg的二號臨時標準使用液和10ml水并混合均勻而制得四號陰性蜂王漿液，向五號試劑瓶中加入500μl濃度為200μg/kg的一號臨時標準使用液和10ml水并混合均勻而制得五號陰性蜂王漿液，向六號試劑瓶中加入1000μl濃度為200μg/kg的一號臨時標準使用液和10ml水并混合均勻而制得六號陰性蜂王漿液；然后分別用一號陰性蜂王漿液、二號陰性蜂王漿液、三號陰性蜂王漿液、四號陰性蜂王漿液、五號陰性蜂王漿液和六號陰性蜂王漿液來代替蜂王漿樣品處理工序中的蜂王漿樣品液，并重復蜂王漿樣品處理工序中的b步驟而分別制得一號標準液、二號標準液、三號標準液、四號標準液、五號標準液和六號標準液，該一號標準液、二號標準液、三號標準液、四號標準液、五號標準液和六號標準液的系列濃度為0μg/kg、0.1μg/kg、0.5μg/kg、2μg/kg、10μg/kg和20μg/kg；將一號標準液、二號標準液、三號標準液、四號標準液、五號標準液和六號標準液通過高效液相色譜儀和三重四極桿串聯質譜儀得到標準曲線；

所述蜂王漿樣品檢測工序中，將蜂王漿樣品處理工序中制得的上機檢測樣液通過高效液相色譜儀和三重四極桿串聯質譜儀，并結合標準曲線制作工序中得到的標準曲線而測得蜂王漿中硝基咪唑類藥物的殘留量；該方法的檢測定量限為甲硝唑0.1μg/kg、洛硝噠唑0.2μg/kg和二甲硝咪唑0.1μg/kg。