[發明專利]檢測SLC26A4基因c.232T＞C突變的試劑盒無效

申請號：	201010180608.9	申請日：	2010-05-21
公開（公告）號：	CN101838698A	公開（公告）日：	2010-09-22
發明（設計）人：	郭玉芬;王艷莉	申請（專利權）人：	蘭州大學
主分類號：	C12Q1/68	分類號：	C12Q1/68
代理公司：	蘭州中科華西專利代理有限公司 62002	代理人：	李艷華
地址：	730000 ***	國省代碼：	甘肅;62
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摘要：
搜索關鍵詞：	檢測 slc26a4 基因 232 突變試劑盒
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及一種檢測基因突變的試劑盒，尤其涉及檢測SLC26A4基因c.232T＞C(p.Y78H)突變的試劑盒。

背景技術

SLC26A4基因位于7q31，其最初是由Everett等定位，并且發現該基因突變可以導致一種常染色體隱性遺傳性疾病：Pendred綜合征，臨床表現為甲狀腺腫，及合并前庭導水管擴大或Mondini畸形(前庭導水管擴大合并耳蝸發育不全)的感音神經性耳聾。后來，Usami等對6例單純前庭導水管擴大家系的SLC26A4基因的篩查結果表明，該基因的突變還可以導致單純前庭導水管擴大，其遺傳模式也是隱性遺傳。由此可見，SLC26A4基因突變可以導致前庭導水管擴大——單純性前庭導水管擴大或者是合并耳蝸畸形的前庭導水管擴大。前庭導水管擴大是內耳最常見的畸形，其在遺傳性耳聾中占到1～8％。臨床上主要表現為高頻聽力損失為主的感音神經性耳聾，聽力損失程度多表現為重度或者是極重度耳聾，發病多在兒童時期，其發病前常有感冒、發燒、外傷等使顱內壓增高的誘因。

與前庭導水管擴大相關的SLC26A4基因mRNA全長4930bp，含21個外顯子，開放閱讀框架2343bp，貫穿外顯子2和外顯子21。該基因編碼的蛋白——Pendrin是一個分子量為86kD，含780個氨基酸的跨膜蛋白，屬于離子轉運子家族。Scott和Bidart等的研究發現，Pendrin主要表達于甲狀腺濾泡細胞的頂膜及內淋巴管和內淋巴囊的主細胞，介導碘離子和氯離子的轉運，在維持甲狀腺組織和內淋巴的離子平衡上發揮作用。在甲狀腺，當Pendrin功能障礙時，其不能把碘離子及時轉運到濾泡膠質，使碘離子在濾泡細胞內積聚，從而不能有效有機化并與甲狀腺球蛋白結合，從而導致Pendred綜合征中甲狀腺腫的發生。Qvortrup等認為，大鼠的內淋巴囊類似甲狀腺濾泡，有平衡膠狀物質填塞囊腔，內淋巴囊主細胞的功能類似于甲狀腺濾泡細胞，可以合成、分泌、吸收、消化蛋白質。氯離子轉運障礙使內淋巴液的成分改變，從而損傷感覺上皮細胞，導致感音神經性耳聾，并且由于滲透壓改變和成分改變的毒性機制導致膜迷路結構改變。由于內淋巴管和內淋巴囊到4歲時才停止發育，因此它們的擴大可以導致周圍骨性結構的改變，例如前庭導水管或耳蝸結構的改變。

對于前庭導水管擴大患者SLC26A4基因突變的篩查，國外已經廣泛開展，報道的致病突變位點超過200個，包括錯義突變、框移突變、無義突變及剪接位點突變，分布于各個外顯子。SLC26A4基因具有明顯的異質性，不同種族其突變形式不完全相同。該基因突變后其編碼的蛋白不能準確定位到細胞膜上，而是存在于內質網或者是高爾基體內，影響離子轉運。但目前尚無c.232T＞C突變的報道。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種判定待測個體的樣本是否存在SLC26A4基因突變的檢測SLC26A4基因c.232T＞C突變的試劑盒。

本發明所要解決的另一個技術問題是提供該試劑盒在檢測前庭導水管擴大相關的位于SLC26A4基因的232位突變中的應用。

為解決上述問題，本發明所述的一種檢測SLC26A4基因c.232T＞C突變的試劑盒，包括

——針對SLC26A4基因或SLC26A4基因編碼區第232位堿基附近設計的PCR引物；

——PCR反應試劑；

——檢測PCR擴增產物的試劑。

所述PCR引物為15～30個堿基，GC含量為45～50％。

所述PCR引物中

上游引物為SLC26A4-3F：5’-GGCAAAAGCATGGTAAGCAC-3’；

下游引物為SLC26A4-3R：5’-AGGGTAAGCAACCATCTGTCA-3’。

所述PCR反應試劑為2.5μl、含15ml?MgCl₂的10×PCR緩沖液，2.0μl、2.5mM的dNTP，0.3μl、5U/μl的耐熱聚合酶，0.25μl熒光染料(Big-Dye?mix)。