[發(fā)明專利]檢測(cè)SLC26A4基因c.232T＞C突變的試劑盒

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010180608.9
• 申請(qǐng)日: 2010-05-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101838698A
• 公開(kāi)（公告）日: 2010-09-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭玉芬;王艷莉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘭州大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 蘭州中科華西專利代理有限公司 62002
• 代理人: 李艷華

1.一種檢測(cè)SLC26A4基因c.232T＞C突變的試劑盒，包括

——針對(duì)SLC26A4基因或SLC26A4基因編碼區(qū)第232位堿基附近設(shè)計(jì)的PCR引物；

——PCR反應(yīng)試劑；

——檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的試劑。

2.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)SLC26A4基因c.232T＞C突變的試劑盒，其特征在于：所述PCR引物為15～30個(gè)堿基，GC含量為45～50％。

3.如權(quán)利要求2所述的檢測(cè)SLC26A4基因c.232T＞C突變的試劑盒，其特征在于：所述PCR引物中

上游引物為SLC26A4-3F：5’-GGCAAAAGCATGGTAAGCAC-3’；

下游引物為SLC26A4-3R：5’-AGGGTAAGCAACCATCTGTCA-3’。

4.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)SLC26A4基因c.232T＞C突變的試劑盒，其特征在于：所述PCR反應(yīng)試劑為2.5μl、含15ml?MgCl₂的10×PCR緩沖液，2.0μl、2.5mM的dNTP，0.3μl、5U/μl的耐熱聚合酶，0.25μl熒光染料。

5.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)SLC26A4基因c.232T＞C突變的試劑盒，其特征在于：所述檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的試劑為測(cè)序檢測(cè)試劑、限制性內(nèi)切酶酶切檢測(cè)試劑、限制性長(zhǎng)度多態(tài)性檢測(cè)試劑、序列特異性引物檢測(cè)試劑或雜交探針檢測(cè)試劑中的任意一種。

6.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)SLC26A4基因c.232T＞C突變的試劑盒在檢測(cè)前庭導(dǎo)水管擴(kuò)大相關(guān)的位于SLC26A4基因的232位突變中的應(yīng)用，包括以下步驟：

(1)采集待測(cè)個(gè)體的血液、體液或組織樣本，提取基因組DNA；

(2)以所述DNA為模板，采用所述PCR引物進(jìn)行PCR反應(yīng)，得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物：

SLC26A4-3F：5’-GGCAAAAGCATGGTAAGCAC-3’

SLC26A4-3R：5’-AGGGTAAGCAACCATCTGTCA-3’；

(3)將所述PCR擴(kuò)增產(chǎn)物純化后進(jìn)行直接測(cè)序，并將測(cè)序結(jié)果與SLC26A4基因標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行比較，確定是否存在SLC26A4基因的c.232T＞C突變位點(diǎn)；

(4)判斷待測(cè)個(gè)體是否為SLC26A4基因突變c.232T＞C導(dǎo)致的前庭導(dǎo)水管擴(kuò)大。

7.如權(quán)利要求6所述的檢測(cè)SLC26A4基因c.232T＞C突變的試劑盒在檢測(cè)前庭導(dǎo)水管擴(kuò)大相關(guān)的位于SLC26A4基因的232位突變中的應(yīng)用，其特征在于：該應(yīng)用還包括按照正常閱讀框架進(jìn)行翻譯以確定c.232T＞C突變，使得位于Pendrin氨基端的第78位極性中性酪氨酸變?yōu)閴A性組氨酸。