[發明專利]一類交鏈孢菌生物堿及其制備方法和用途

無效

• 申請號: 201010180422.3
• 申請日: 2010-05-24
• 公開（公告）號: CN101921711A
• 公開（公告）日: 2010-12-22
• 發明（設計）人: 譚仁祥;張愛華;谷文;宋勇春;王玉蓉;胥蘇海
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P17/12;C07D221/16;A61K31/473;A61P35/00;C12R1/645
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 胡錫瑜

技術領域

本發明屬于微生物工程及制藥工程技術領域，具體涉及從密葉苔草內生真菌(Alternariasp.)固體發酵物中提取的一類交鏈孢菌生物堿及其制備方法與抗腫瘤作用。

背景技術

植物內生菌是指那些在其生活史的一定或全部階段生活在健康植物的各種組織內部，且不引起宿主明顯感染癥狀的真菌和細菌(包括放線菌)。植物內生菌和宿主之間存在著互惠共生的關系，它可促進宿主植物的生長，提高宿主抵抗逆境、病原體、以及動物危害等方面的能力，使宿主植物比一般未感染的植株更具生存競爭力。內生菌由于其獨特的生境，能夠產生豐富多樣的次生代謝產物，它們常具有新穎的結構和多種生物活性，在農業和醫藥業都具有重要的應用前景，成為近年來一個研究的熱點。

腫瘤是當前危害人類健康的嚴重疾病，其死亡率僅次于心血管疾病而列居第二。抗癌藥物的研究和開發一直受到科學家們的重視。由于許多化學合成的抗癌藥在殺死腫瘤細胞的同時對正常細胞的毒副作用非常強，而且治療過程中腫瘤細胞易產生多藥耐藥性而常導致治療失敗。目前，從天然產物中尋找有效的抗腫瘤藥物已成為國內外重要的研究課題。

發明內容

本發明需要解決的問題是：

提供一類具有抗腫瘤作用的交鏈孢菌生物堿(alternarlactam)；

提供一種發酵生產及提取分離交鏈孢菌生物堿(alternarlactam)的方法；

提供一種全合成交鏈孢菌生物堿(alternarlactam)的制備方法；

本發明的交鏈孢菌生物堿(alternarlactam)在制備抗腫瘤藥物中的應用。

本發明通過下述技術方案予以實現。

1交鏈孢菌生物堿(alternarlactam)，它具有下述結構通式：

其中1，2，3，3a，4，5，5a，6，7，8，9，9a，9b，10為碳原子序數編號，4為氮原子序數編號。

2交鏈孢菌生物堿(alternarlactam)的分離方法，它包括下述步驟：

1)將新鮮的從密葉苔草(Carex?maubertiana?Boott.)葉片中分離、純化得到的交鏈孢屬菌菌絲體塊接種到PD培養基(土豆200g，蔗糖20g，蒸餾水1000ml)上(每瓶300mL)，在旋轉式搖床(28℃，150rpm)振蕩培養6天，

2)然后將發酵液接種于400瓶小米固體培養基中，每瓶15mL菌液。接種后的固體培養基在28℃下靜置培養30天，所得的固體培養物干燥、磨碎后稱重為2000克，

3)將步驟2所得固體培養物用3L的氯仿/甲醇混合溶劑(1∶1，V/V)提取5次，將提取液濃縮，得粗浸膏F1，

4)將粗浸膏F1用適量的甲醇溶解，然后把溶液置于-4℃的冰箱過夜，過濾除去析出的蠟狀固體，將濾液減壓濃縮，得浸膏F2，

5)對浸膏F2進行硅膠柱層析，先用10倍體積的氯仿洗脫，得浸膏F3，

6)然后用氯仿/甲醇(體積比100/1)混合溶液繼續對浸膏F2進行洗脫，合并白色部分洗脫液得白色浸膏F4，

7)對浸膏F4，用凝膠柱層析氯仿/甲醇(體積比1/1)得到左旋交鏈孢菌生物堿[(-)-alternarlactam]。

3交鏈孢菌生物堿(alternarlactam)的合成方法，它包括下述步驟：

1)以3，5-二甲氧基苯胺為原料，通過兩步反應制得中間體A(2-氨基-4，6-二甲氧基苯甲酸)，

2)再以3-甲基環戊酮為原料，通過鄰位氯代然后氧化兩步反應生成中間體B(4-甲基-1，2-環戊二酮)，

3)將中間體A通過重氮化反應生成相應的重氮鹽，再加入中間體B即可生成3環的內酯C，

4)在甲酰胺存在的情況下，通入氨氣，將化合物C轉化為3環內酰胺D，

5)再通過對化合物D進行選擇性脫甲基，得外消旋交鏈孢菌生物堿[(±)-alternarlactam]，

6)對外消旋交鏈孢菌生物堿[(±)-alternarlactam]，用手性高壓液相色譜法(手性柱：ChiralpakAD-H?column；流動相：甲醇/二乙醇胺＝100/0.1(v/v)；流速：1.0ml/min)分離得到一對對應異構體左旋交鏈孢菌生物堿[(-)-alternarlactam]和右旋交鏈孢菌生物堿[(+)-alternarlactam]。