[發明專利]一種磁性熒光納米粒子標記家蠅神經細胞的方法有效
| 申請號： | 201010179854.2 | 申請日： | 2010-05-21 |
| 公開（公告）號： | CN101858908A | 公開（公告）日： | 2010-10-13 |
| 發明（設計）人： | 周健;任天瑞;李興玉 | 申請（專利權）人： | 上海師范大學 |
| 主分類號： | G01N33/533 | 分類號： | G01N33/533 |
| 代理公司： | 上海伯瑞杰知識產權代理有限公司 31227 | 代理人： | 楊杰民 |
| 地址： | 200234 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 磁性 熒光 納米 粒子 標記 家蠅 神經細胞 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種磁性熒光納米粒子標記家蠅神經細胞的方法，步驟如下：
(1)制備磁性熒光納米粒子復合物：
A?稱取表面已修飾氨基的磁性熒光納米粒子，加入pH值6.5-7.5的磷酸緩沖液，超聲分散5-15min；
B?向步驟A產物中加入0.1-0.5mol/L的N，N-二環己基碳酰亞胺縮合劑；37℃孵育10-25min；
C?向步驟B產物加入0.05-0.5mol/L的γ-氨基丁酸溶液，37℃孵育10-20min；
D?將步驟C產物加入磁場，依次用N，N-二甲基甲酰胺和雙蒸水洗滌磁粒2遍；
E?將步驟D所得磁粒加入青霉素和鏈霉素混合液，-20℃保存備用；
(2)制備家蠅神經細胞懸液：
A?取活的家蠅成蟲，置于4℃冰箱中放置5-8分鐘，浸入75％的酒精消毒；
B?將消毒過的家蠅，平放在表面皿上，切去頭，收集家蠅頭顱；
C?將家蠅頭顱置入pH6.5-7.5的磷酸緩沖液，制成家蠅神經細胞懸液后通過80目篩，濾液備用；
(3)磁性納米粒子標記家蠅神經細胞：
A向家蠅神經細胞懸液，加入連有配體的磁性熒光納米粒子復合物的雙抗懸濁液；置于37℃、飽和濕度、5％CO2培養箱中孵育15-30min；
B磁場下棄去清液，用pH6.5-7.5的磷酸緩沖液洗滌磁粒2次；
C向上述磁粒加入pH6.5-7.5的磷酸PBS緩沖液、搖勻、制片、吹干，熒光顯微鏡下觀察細胞形態。
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