[發(fā)明專利]梅毒特異性IgM抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條及其制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010179134.6
• 申請(qǐng)日: 2010-05-19
• 公開（公告）號(hào): CN101858916A
• 公開（公告）日: 2010-10-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林麗蓉;張忠英;楊天賜;張長(zhǎng)弓
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廈門大學(xué)附屬中山醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577;G01N33/532;G01N33/558;G01N33/571
• 代理公司: 廈門南強(qiáng)之路專利事務(wù)所 35200
• 代理人: 馬應(yīng)森

1.梅毒特異性IgM抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條，其特征在于設(shè)有載體板、加樣墊、膠體金墊、硝酸纖維膜、梅毒特異性IgM抗體檢測(cè)線、對(duì)照線和吸收墊；加樣墊、膠體金墊、硝酸纖維膜和吸收墊依次粘貼在載體板上表面，加樣墊的一端設(shè)在膠體金墊的一端上，膠體金墊的另一端設(shè)在硝酸纖維膜的一端上，吸收墊的一端設(shè)在硝酸纖維膜的另一端上，梅毒特異性IgM抗體檢測(cè)線和對(duì)照線依次設(shè)在硝酸纖維膜上；在梅毒特異性IgM抗體檢測(cè)線處包被抗人IgM特異性片段μ鏈單克隆抗體，在對(duì)照線處包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗體。

2.如權(quán)利要求1所述的梅毒特異性IgM抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條，其特征在于所述載體板為PVC板。

3.如權(quán)利要求1所述的梅毒特異性IgM抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1)制備梅毒重組抗原TPN17、TPN47

采用基因克隆技術(shù)，PCR擴(kuò)增編碼梅毒螺旋體抗原的DNA，并插入大腸桿菌中使其表達(dá)，得梅毒重組抗原TPN17和TPN47

2)硝酸纖維素膜的點(diǎn)樣

在硝酸纖維素膜IgM檢測(cè)線上包被抗人IgM特異性片段μ鏈單克隆抗體，在對(duì)照線處包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47IgG抗體，晾干；

3)制備膠體金

采用檸檬酸三鈉還原方法制備25nm膠體金，取1％氯金酸1mL加入到100mL去離子雙蒸水中，得到的氯金酸濃度為0.01％，置于帶冷凝裝置的燒瓶中加熱至沸騰，磁力加熱攪拌下加入1％檸檬酸三鈉水溶液2.0mL，繼續(xù)加熱直至溶液呈葡萄酒色為止，冷卻后置于棕色瓶中4℃冰箱保存?zhèn)溆茫?/p>

4)膠體金與TPN17、TPN47的標(biāo)記

膠體金與梅毒特異性抗原TPN17的標(biāo)記：取膠體金10mL，用0.1mol/LNaOH調(diào)至pH5.4，加100μg?TPN17，混勻，放置5min，加入5％BSA?1mL混勻，4℃、10000r/min離心1h，棄上清，將沉淀用TBS緩沖液溶解至10mL，4℃、10000r/min離心1h，棄上清，沉淀用TBS稀釋至1mL，得膠體金標(biāo)記的TPN17抗原；

膠體金與梅毒特異性抗原TPN47的標(biāo)記同上操作，得膠體金標(biāo)記的TPN47抗原；

將膠體金標(biāo)記的TPN17抗原和膠體金標(biāo)記的TPN47抗原混合后，均勻地涂于玻璃纖維膜上，烘干，制備成膠體金墊；

5)制備免疫層析檢測(cè)條

將加樣墊、膠體金墊、硝酸纖維膜和吸收墊依次粘貼在載體板上表面，加樣墊的一端設(shè)在膠體金墊的一端上，膠體金墊的另一端設(shè)在硝酸纖維膜的一端上，吸收墊的一端設(shè)在硝酸纖維膜的另一端上，梅毒特異性IgM抗體檢測(cè)線和對(duì)照線依次設(shè)在硝酸纖維膜上；在梅毒特異性IgM抗體檢測(cè)線處包被抗人IgM特異性片段μ鏈單克隆抗體，在對(duì)照線處包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗體，用切條機(jī)切成條狀，得梅毒特異性IgM抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條。

4.如權(quán)利要求3所述的梅毒特異性IgM抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條的制備方法，其特征在于在步驟2)中，所述抗人IgM特異性片段μ鏈單克隆抗體的濃度為1～4mg/mL。

5.如權(quán)利要求3所述的梅毒特異性IgM抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條的制備方法，其特征在于在步驟2)中，所述羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗體由抗TPN17-IgG抗體與抗TPN47-IgG抗體按體積比1∶1混合，其終濃度為1～4mg/mL；三者點(diǎn)樣量為1μL/cm。

6.如權(quán)利要求3所述的梅毒特異性IgM抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條的制備方法，其特征在于在步驟3)中，所述檸檬酸三鈉的濃度為2％。

7.如權(quán)利要求3所述的梅毒特異性IgM抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條的制備方法，其特征在于在步驟4)中，所述將膠體金標(biāo)記的TPN17抗原和膠體金標(biāo)記的TPN47抗原混合，是膠體金標(biāo)記的TPN17抗原和膠體金標(biāo)記的TPN47抗原以體積比1∶0.2～5混合。

8.如權(quán)利要求3所述的梅毒特異性IgM抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條的制備方法，其特征在于在步驟4)中，所述烘干的溫度為37℃。