[發(fā)明專利]Delta1轉(zhuǎn)導(dǎo)的OP9細(xì)胞共培養(yǎng)體系的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010178255.9
• 申請日: 2010-05-21
• 公開（公告）號: CN102250834A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃家學(xué);侯士芳;王雪蓮;張宇光;孟恒星;陳曉波
• 申請（專利權(quán)）人: 協(xié)和干細(xì)胞基因工程有限公司
• 主分類號: C12N5/0735
• 分類號: C12N5/0735;C12N5/0775;C12N5/0789
• 代理公司: 天津才智專利商標(biāo)代理有限公司 12108
• 代理人: 王曉紅

1.一種Delta1轉(zhuǎn)導(dǎo)的OP9細(xì)胞共培養(yǎng)體系的方法，其特征在于，包括以下步驟：(1)OP9-DL1細(xì)胞失去支持HSCs發(fā)育成為B細(xì)胞的能力；(2)OP9-DL1獲得誘導(dǎo)HSCs發(fā)育成為T細(xì)胞的正常的程序。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的Delta1轉(zhuǎn)導(dǎo)的OP9細(xì)胞共培養(yǎng)體系的方法，其特征在于，包括以下步驟：OP9-載體和小鼠Delta-like?1轉(zhuǎn)導(dǎo)OP9細(xì)胞基質(zhì)細(xì)胞系保存在添加了20％牛血清的改良培養(yǎng)基中；干細(xì)胞因子Flt3-L和IL-7的濃度依照R&D使用說明添加，祖細(xì)胞接種到平板的前一天，每個孔板中的基質(zhì)細(xì)胞數(shù)要達(dá)到2×10⁴；將祖細(xì)胞以不同的密度添加到不同孔板的基質(zhì)細(xì)胞，確定產(chǎn)生最佳淋巴細(xì)胞的祖細(xì)胞添加濃度；培養(yǎng)一周后，用0.53m?M?EDTA/PBS，pH7.4來收集基質(zhì)細(xì)胞和造血細(xì)胞，然后，3000-10000的造血細(xì)胞與基質(zhì)細(xì)胞共同轉(zhuǎn)接到新鮮的基質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)；經(jīng)過幾周的分化觀察后，用基質(zhì)細(xì)胞通過VCAM-1抗體染色的方法被去除，而死亡細(xì)胞則通過7-aminoactinomycinD染色被去除，當(dāng)造血細(xì)胞的得率達(dá)到95％，此培養(yǎng)條件和細(xì)胞密度可取。