[發明專利]免疫層析法檢測試劑及其制作方法

無效

• 申請號: 201010177793.6
• 申請日: 2010-05-19
• 公開（公告）號: CN101852799A
• 公開（公告）日: 2010-10-06
• 發明（設計）人: 劉光明
• 申請（專利權）人: 南京黎明生物制品有限公司
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531;G01N33/558
• 代理公司: 南京天翼專利代理有限責任公司 32112
• 代理人: 王鵬翔

技術領域

本發明涉及一種醫療檢測產品及其制作方法，尤其涉及一種免疫層析法檢測試劑及其制作方法。

背景技術

免疫層析法是二十世紀九十年代興起的一種基于免疫膠體顆粒技術的快速診斷技術，其原理是將特異的抗體先固定于硝酸纖維膜的某一區帶，當該干燥的硝酸纖維素膜一端浸入樣品后，由于毛細管作用，樣品將沿著該膜向前移動，當移動至固定有抗體的區域時，樣品中相應的抗原即與該抗體發生特異性結合，若用免疫膠體顆粒可使該區域顯示一定的顏色，從而實現特異性的免疫診斷。檢測標本種類多：既可用于查血，又可用于檢尿或唾液，因而適合各種人群的檢查。因此該技術自發明以來得到了快速的發展，現在已應用在多個檢測領域。基于該技術的產品已被包括廣大基層醫療機構和家庭個人用戶接受并使用。現有技術中的免疫層析法檢測原理如圖1所示，圖2為層析流程圖。該技術與以往常規診斷方法相比具有以下突出優點：

1).快速：全部檢測過程僅需3-20分鐘；

2).簡便：不需其它任何儀器設備，操作也極其簡單，可隨時隨地進行；

3).可單份檢測：對標本既能成批檢測，又可單份檢測，患者可立刻拿到結果，不必等待；

4).穩定性好：試劑穩定，可長期保存。

但是隨著使用者范圍的進一步擴大，未經過專門培訓的用戶特別是個人用戶在使用該產品時也暴露出了一定的問題。目前通常用來作為顯色劑的膠體顆粒為膠體金，膠體金只能顯示一種顏色-紅色。因此基于膠體金的免疫層析試劑顯示的質控線和測試線均為紅色。但對一些用戶而言，他們并不能正確辨別哪條是質控線，哪條是測試線，特別是在一根試紙條上不同位置上有多條紅線分別代表不同分析物時，用戶不能正確判斷紅線所對應的分析物，容易導致誤判。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對上述現有技術的不足，提供一種能同時清楚和準確地通過不同顏色顯示檢測區和質控區，并且也能夠通過不同的顏色顯示不同的檢測區的免疫層析法檢測試劑及其制作方法。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為：一種免疫層析法試劑的制作方法，包括以下步驟：

1).用至少兩種顏色的直徑為200-500nm的聚苯乙烯膠體顆粒作為彩色乳膠顆粒分別標記至少兩種抗體：a，用0.01M?PH7.4的PBS把彩色乳膠顆粒稀釋成1％的終濃度(質量百分比)，再加入抗體或抗原使其終濃度為0.1mg/ml；b，將上述溶液置于4℃反應并且過夜；c，向步驟b所獲得的溶液中加入終濃度為1％的BSA并封閉1小時；d，將步驟c中的溶液進行離心，得到乳膠抗體結合物的沉淀物；e，將步驟d中的沉淀物用含0.1％BSA的0.01M?PH7.4的PBS復溶，復溶后的濃度為1％(質量百分比)，并置于4℃以備用；

2).點膜：用0.01M?PH7.4的PBS分別將一種抗原和至少一種抗體稀釋，所述抗原是特異性針對步驟1)中所述至少兩種抗體中的一個抗體的抗原，步驟1)中剩下的抗體與步驟2)中所述至少一種抗體相同；稀釋后的濃度為至0.5-3.0mg/ml，用點膜機將每種抗體以及抗原的稀釋液分別點在硝酸纖維素膜上的不同區域，然后將硝酸纖維素膜置于37℃的溫度下烘干2小時，密封好并置于室溫備用；

3).點乳膠：用含0.1％BSA的0.01M?PH7.4的PBS將步驟1)步中標記好的乳膠抗體結合物稀釋，稀釋后的濃度為0.2％-0.6％(質量百分比)，用點乳膠機噴點在聚酯膜上，然后將聚酯膜置于37℃的溫度下烘干2小時，密封好并置于室溫備用；

4).組裝：將玻璃纖維、點好的聚酯膜、點好的硝酸纖維素膜和吸水濾紙分別按順序粘貼在PVC片材上。

按照上述方法將玻璃纖維、點好的聚酯膜、點好的硝酸纖維素膜和吸水濾紙分別按順序粘貼在PVC片材上后，再切成相應寬度裝入塑料卡中待用。使用時，將待測標本加到玻璃纖維上，待測標本在毛細作用下向吸水濾紙端層析，在層析過程中，待測標本先將聚酯膜上的乳膠抗體結合物復溶，復溶后的混合物繼續層析到硝酸纖維素膜上，與硝酸纖維素膜上包被的抗體和抗原發生免疫反應，顯現出相應的帶顏色的線條。

作為本所發明進一步改進的技術方案，在步驟1)中，用兩種、三種或者四種不同顏色的乳膠顆粒標記兩種、三種或者四種抗體，每一種顏色的乳膠顆粒標記一種抗體；在步驟2)中，用0.01M?PH7.4的PBS分別將一種、兩種或者三種抗體和一種抗原稀釋。采用不同顏色的乳膠標記不同的抗體，測試時，各種不同的抗體以及抗原所在的區域能夠顯示不同的顏色。