[發明專利]免疫層析法檢測試劑及其制作方法

無效

• 申請號: 201010177793.6
• 申請日: 2010-05-19
• 公開（公告）號: CN101852799A
• 公開（公告）日: 2010-10-06
• 發明（設計）人: 劉光明
• 申請（專利權）人: 南京黎明生物制品有限公司
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531;G01N33/558
• 代理公司: 南京天翼專利代理有限責任公司 32112
• 代理人: 王鵬翔

1.一種免疫層析法檢測試劑的制作方法，包括以下步驟：

1).用至少兩種顏色的直徑為200-500nm的聚苯乙烯膠體顆粒作為彩色乳膠顆粒分別標記至少兩種抗體：a，用0.01M?PH7.4的PBS把彩色乳膠顆粒稀釋成1％的終濃度(質量百分比)，再加入抗體或抗原使其終濃度為0.1mg/ml；b，將上述溶液置于4℃反應并且過夜；c，向步驟b所獲得的溶液中加入終濃度為1％的BSA并封閉1小時；d，將步驟c中的溶液進行離心，得到乳膠抗體結合物的沉淀物；e，將步驟d中的沉淀物用含0.1％BSA的0.01M?PH7.4的PBS復溶，復溶后的濃度為1％(質量百分比)，并置于4℃以備用；

2).點膜：用0.01M?PH7.4的PBS分別將一種抗原和至少一種抗體稀釋，所述抗原是特異性針對步驟1)中所述至少兩種抗體中的一個抗體的抗原，步驟1)中剩下的抗體與步驟2)中所述至少一種抗體相同；稀釋后的濃度為至0.5-3.0mg/ml，用點膜機將每種抗體以及抗原的稀釋液分別點在硝酸纖維素膜上的不同區域，然后將硝酸纖維素膜置于37℃的溫度下烘干2小時，密封好并置于室溫備用；

3).點乳膠：用含0.1％BSA的0.01M?PH7.4的PBS將步驟1)步中標記好的乳膠抗體結合物稀釋，稀釋后的濃度為0.2％-0.6％(質量百分比)，用點乳膠機噴點在聚酯膜上，然后將聚酯膜置于37℃的溫度下烘干2小時，密封好并置于室溫備用；

4).組裝：將玻璃纖維、點好的聚酯膜、點好的硝酸纖維素膜和吸水濾紙分別按順序粘貼在PVC片材上；

2.根據權利要求1所述的免疫層析法檢測試劑，其特征在于：在步驟1)中，用兩種、三種或者四種不同顏色的乳膠顆粒標記兩種、三種或者四種抗體，每一種顏色的乳膠顆粒標記一種抗體；在步驟2)中，用0.01M?PH7.4的PBS分別將一種、兩種或者三種抗體和一種抗原稀釋。

3.一種根據權利要求1或2的免疫層析法試劑的制作方法所制作的免疫層析法檢測試劑，包括PVC片材(1)，PVC片材(1)上依次設有加樣區(2)、第一反應區(3)、第二反應區(4)和吸水區(5)，加樣區(2)、第一反應區(3)、第二反應區(4)和吸水區(5)依次相接并設置在PVC片材(1)表面，所述加樣區(2)為玻璃纖維層，所述第一反應區(3)為聚酯膜，所述第二反應區(4)為硝酸纖維素膜，所述吸水區(5)為吸水濾紙，所述硝酸纖維素膜上設有多種與聚酯膜上的乳膠抗體結合物中的抗體相同的抗體和一種抗原，所述多種抗體和抗原分別呈帶狀并且相互平行設置在硝酸纖維素膜上；其特征在于：所述聚酯膜上設有至少兩種乳膠抗體結合物，所述每種乳膠抗體結合物標記有不同的顏色，所述膠抗體結合物中的乳膠顆粒為彩色乳膠顆粒，所述彩色乳膠顆粒是直徑為200-500nm的聚苯乙烯膠體顆粒。

4.根據權利要求1所述的免疫層析法檢測試劑，其特征在于：所述聚酯膜上設有兩種、三種或者四種乳膠抗體結合物，相應的，所述硝酸纖維素膜上設有一種、兩種或者三種抗體以及一種抗原。