[發明專利]一種利用魷魚肝臟蛋白制備血管緊張素轉換酶抑制肽的方法

無效

• 申請號: 201010177329.7
• 申請日: 2010-05-18
• 公開（公告）號: CN102250994A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發明（設計）人: 謝超;霍建聰;丁璞
• 申請（專利權）人: 浙江海洋學院
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K14/435
• 代理公司: 寧波誠源專利事務所有限公司 33102
• 代理人: 袁忠衛

技術領域

本發明涉及魷魚肝臟蛋白深加工的方法，尤其涉及一種利用魷魚肝臟蛋白制備血管緊張素轉換酶(ACE)抑制肽的方法。

背景技術

魷魚加工過程中有約占魷魚體重30％的頭、足、肝臟及表皮等廢棄物產生。對于這些廢棄物，一般的處理方法是加工魚粉，或者掩埋，這不但是對漁業資源的巨大浪費，而且還存在著環境污染的問題。在國外，如西班牙和日本對于魷魚肝臟的利用采用自身酶解發酵法生產魷溶漿、魷魚粉等作為魚類飼料。在國內魷魚肝臟的利用和研究還有比較大的發展空間，目前僅有魷魚肝臟干粉的加工，并且是用作飼料，技術水平不高。目前，有從魷魚皮制備膠原蛋白活性肽，如專利號為200710013140.2，一種魷魚皮膠原蛋白活性肽的制備，將魷魚皮用清水洗凈，加入NaOH的水溶液浸泡，再用清水反復洗滌至pH中性；加入稀酸水溶液浸泡，再洗滌至pH中性；攪拌下，在熱水中抽提膠原蛋白，過濾除去不溶物；在攪拌下，加酶酶解1-6h，酶解溫度為40-50℃，在90-100℃下滅酶4-10min；用堿液調pH至中性，酶解液經過濾后，再依次經過截留分子量為8KD的超濾膜超濾、納濾脫鹽，最后真空濃縮，噴霧干燥。產品具有很強的生物活性，可用于制備抗氧化、降血壓、抗動脈粥樣硬化或美容的保健食品或藥品。但是它是從魷魚皮來制取。本研究的目的就是從廢棄的魷魚肝臟中提取蛋白質和生物活性肽，以使寶貴的蛋白質和油脂資源得以綜合利用，提高附加值，減少廢棄物的排放，凈化環境。

魷魚肝臟中提取生物活性肽的研究，可提供消化吸收效率更高的蛋白質水解產物，用于食品和飼料行業，而且制備的生物活性肽還可應用于疾病的防治，能為維護人類的健康作貢獻。

目前，有許多不同種類的藥物應用于高血壓的治療，其中血管緊張素轉換酶(ACE)抑制肽(即降血壓活性肽)是一種治療高血壓的主要藥物。從1981年第一個口服有效的人工合成ACE抑制劑卡托普利(Captopril)批準使用以來，現在應用于臨床上的ACE抑制劑已達18種，但人工合成的ACE抑制劑在臨床應用過程中往往會產生副作用，如咳嗽、味覺功能紊亂及皮疹等。因此，尋找天然的ACE抑制劑引起了研究者的極大興趣。試驗表明，天然的ACE抑制肽對自發性高血壓大鼠(SHR)及高血壓患者具有降壓作用，而對正常血壓大鼠及人無降壓作用。另外，這些肽是經食品級酶在混合條件下處理獲得的，其安全性高。ACE抑制肽在開發具有降血壓功能的功能食品中具有廣闊前景。

目前生產ACE抑制肽的方法大體有三種：一是提取存在于生物體中的各類天然ACE抑制肽；二是通過化學法或酶法水解蛋白質，化學法常采用加熱和酸處理的方法，而體外蛋白酶水解包括直接酶解和利用微生物間接酶解兩類；三是用重組DNA技術、酶法、化學法合成活性肽。其中，酶解蛋白質生產ACE抑制肽因其安全性高、能在溫和的條件下進行定位水解分裂產生特定的肽段，而且水解過程易受控制，價廉易推廣，引起人們的極大興趣。因而近幾年報道的ACE抑制肽的制備方法皆為酶解法，酶的選擇是酶解法生產活性肽的關鍵，應根據酶的專一性從眾多的蛋白酶中篩選出能水解所需肽段，目前廣泛使用的蛋白酶有木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶等。

由于ACE抑制肽的氨基酸組成和結構差別均較大，沒有一個固定或較特殊的氨基酸組成，并且蛋白酶解產物成分相當復雜，這就增加了它的分離提取難度。因此，建立一套適宜的分離提取技術工藝是將ACE抑制肽推向商業化生產的必要條件。ACE抑制肽的分離提取甚至結構鑒定是一項最復雜，也是最有意義的工作。所用的分離純化的方法主要有：離子交換樹脂、超濾、凝膠過濾色譜、高效液相色譜、聚丙稀酰胺凝較電泳等。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是根據上述技術現狀提供一種從廢棄的魷魚肝臟中提取蛋白質進而制備血管緊張素轉換酶(ACE)抑制肽的方法，提取分離工藝合理，易控制易操作，制得的活性肽具有較高的活性。

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案為：一種利用魷魚肝臟蛋白制備血管緊張素轉換酶抑制肽的方法，其特征在于包括以下步驟：

1)采取丙酮浸提法提取魷魚肝臟蛋白：將魷魚肝臟與水按質量比1∶1～1∶1.5混合，充入氮氣10～20分鐘，加入占魷魚肝臟重量0.1～0.5％的L-抗壞血酸-6-棕櫚酸酯抗氧劑，放入高壓鍋中處理20～30min，離心處理，除去上層魚油，用丙酮洗滌數次，將組織脫水制成丙酮粉，真空干燥即得脫脂魷魚肝臟蛋白；