[發明專利]一種利用魷魚肝臟蛋白制備血管緊張素轉換酶抑制肽的方法

無效

• 申請號: 201010177329.7
• 申請日: 2010-05-18
• 公開（公告）號: CN102250994A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發明（設計）人: 謝超;霍建聰;丁璞
• 申請（專利權）人: 浙江海洋學院
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K14/435
• 代理公司: 寧波誠源專利事務所有限公司 33102
• 代理人: 袁忠衛

1.一種利用魷魚肝臟蛋白制備血管緊張素轉換酶抑制肽的方法，其特征在于包括以下步驟：

1)采取丙酮浸提法提取魷魚肝臟蛋白：將魷魚肝臟與水按質量比1∶1～1∶1.5混合，充入氮氣10～20分鐘，加入占魷魚肝臟重量0.1～0.5％的L-抗壞血酸-6-棕櫚酸酯抗氧劑，放入高壓鍋中處理20～30min，離心處理，除去上層魚油，用丙酮洗滌數次，將組織脫水制成丙酮粉，真空干燥即得脫脂魷魚肝臟蛋白；

2)用胃蛋白酶酶解魷魚肝臟蛋白：以脫脂魷魚肝臟蛋白為底物，在水解溫度35～38℃，pH為1.5-2.5，酶與底物的比為2～3％，底物濃度為1～3％條件下水解魷魚肝臟蛋白18～25h，其中百分比為質量百分比；

3)將得到的魷魚肝臟蛋白酶解液進行超濾處理；

4)將超濾后的產物用Sephadex?G-50凝膠柱初步分離，得到粗分物的ACE抑制肽；

5)在粗分物的ACE抑制肽中選取活性高的組分用DEAE陰離子交換柱進行分離純化；

6)將純化后得到的活性高的組分用Sephadex?LH-20繼續分離純化；

7)最后檢測純度，得到血管緊張素轉換酶抑制肽。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟1中離心處理工藝為4000～10000rpm/min處理20～40min。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟3的超濾處理的過程為：

1)采用超濾裝置將魷魚肝臟蛋白酶解液進行超濾，濾膜為截留分子量1kDa～30kDa。

2)將截留液用蒸餾水稀釋后繼續超濾，合并收集的超濾液并進行冷凍干燥。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟4的凝膠柱初步分離的工藝為：用蒸餾水進行洗脫，流速為20～40mL/h，并測定各肽峰抑制ACE的活性。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于所述的凝膠柱中凝膠采用葡萄糖凝膠，分離的分子量為1kDa～10kDa。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟5的分離純化具體過程為：選取活性高的組分上樣先用水洗脫，再用0～1mol/L?NaCl溶液進行線性洗脫，流速為20～28mL/h，并測定各肽峰抑制ACE的活性。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟6的分離純化工藝條件為：洗脫液為25～35％(wt)的甲醇溶液，流速為20～28mL/h，并測定各肽峰抑制ACE的活性。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟7的檢測純度是采用反相高效液相色譜C18柱檢測純度，洗脫液甲為含0.01％～0.03％TFA的水，洗脫液乙為含0.01％～0.03％TFA的乙腈溶液，先用5％～10％的甲液洗脫，再用洗脫梯度為95％～98％乙液洗脫，流速為20～24mL/h，采用體積濃度。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述高壓鍋采用115～125℃。