[發明專利]環介導恒溫擴增技術快速檢測鏈狀亞歷山大藻的方法

無效

• 申請號: 201010173310.5
• 申請日: 2010-05-12
• 公開（公告）號: CN101942507A
• 公開（公告）日: 2011-01-12
• 發明（設計）人: 蔣科技;張鳳英;馬春艷;馬凌波
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院東海水產研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所 31233
• 代理人: 黃志達;謝文凱

1.一種環介導恒溫擴增技術快速檢測鏈狀亞歷山大藻的方法，包括：

(1)赤潮藻類的基因組DNA提取

(2)LAMP擴增引物

兩個外引物：

LZ-F31：5’-GTTTAATGCAAAGTAGCTTTCA-3’

LZ-B31：5’-CTTCAGCTTGTCCCAGTT-3’；

兩個內引物：

LZ-FIP1：5’-CATCCAGGTTCAATGCAAAACAT-ATTTAATGCTGATTAGCATTGTTG-3’

LZ-BIP1：5’-GTTTACAACCTAAACATGGTTTCGT-GTGCACATTTACAAATATCAACC-3’；

(3)LAMP擴增反應體系

(4)LAMP擴增產物的檢測。

2.根據權利要求1所述的一種環介導恒溫擴增技術快速檢測鏈狀亞歷山大藻的方法，其特征在于：所述步驟(3)中的LAMP擴增反應體系所用試劑為：2.5uL?10×buffer，2個內引物LZ-FIP1和LZ-BIP1的終濃度均為1.6μM，兩個外引物LZ-F31和LZ-B31的終濃度均為0.2μM，還包括：6mM?MgSO4，0.6mM?dNTP，0.6M?Betaine(Sigma-Aldrich)，8U?BstDNA聚合酶，1μL?DNA模板。

3.根據權利要求1所述的一種環介導恒溫擴增技術快速檢測鏈狀亞歷山大藻的方法，其特征在于：所述步驟(3)中的LAMP擴增反應體系的條件為：反應溫度63℃，反應時間60min；85℃3min，終止反應。

4.根據權利要求1所述的一種環介導恒溫擴增技術快速檢測鏈狀亞歷山大藻的方法，其特征在于：所述步驟(4)中的LAMP擴增產物檢測，在反應管內可見到大量白色沉淀產生則為陽性；或加2μL?100×SYBR?Green?I于反應管中，反應管呈現綠色為陽性，反應管內顏色不變者為陰性。