[發(fā)明專利]食品中大腸菌群的快速檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010173224.4
• 申請日: 2010-05-11
• 公開（公告）號: CN101831485A
• 公開（公告）日: 2010-09-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 嚴守雷;繆素娜;鄧少雅;吳俊;黃文彪;潘思軼
• 申請（專利權(quán)）人: 佛山市海天調(diào)味食品有限公司;佛山市海天(高明)調(diào)味食品有限公司
• 主分類號: C12Q1/34
• 分類號: C12Q1/34;C12Q1/10;C12Q1/06;G01N21/76
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 曹志霞;李贊堅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及菌群的檢測，特別涉及一種食品中大腸菌群的檢測方法。

背景技術(shù)

在食品行業(yè)，大腸菌群的含量是一項重要的衛(wèi)生指標。目前傳統(tǒng)國家標準方法(GB)采用9管發(fā)酵，48-72小時才可以出結(jié)果，存在滯后現(xiàn)象，檢測效率低。改進后的方法如：熒光方法(SN)、顯色培養(yǎng)基方法、膜過濾方法，這幾種方法需要24-48小時可以出結(jié)果，仍不能達到快速檢測的目的。另外，免疫學(xué)方法，雖然8小時可以出結(jié)果，但檢出限有限，同時檢測成本高，一旦菌體發(fā)生變異，檢測結(jié)果就不準確；分子生物學(xué)方法，雖然12小時可以出結(jié)果，明顯提高了檢測靈敏度，但是該方法檢測成本較貴、操作繁雜、對操作員的技術(shù)要求高，不利于推廣。

因此，開發(fā)適宜生產(chǎn)需要、操作簡單的快速大腸菌群檢測方法十分必要。在所有方法中利用β-半乳糖苷酶作為標記物檢測大腸菌具有較好的應(yīng)用潛力。可以保證建立的快速檢測方法具有操作簡單、低成本等優(yōu)點，同時該方法也存在很大的挑戰(zhàn)，如何達到國家標準方法的檢出限，如何降低檢出所消耗的時間，提高檢出速率等。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于，提供一種食品中大腸菌群的快速檢測方法，利用β-半乳糖苷酶作為標記物檢測調(diào)味品中的大腸菌群，能以較高的檢出速率達到國家標準方法的檢出限。

為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案是，一種食品中大腸菌群的快速檢測方法，包括如下步驟：

1)對樣品進行菌體分離富集，去除干擾物；

2)將分離的菌體懸浮于增菌增酶培養(yǎng)液中，在39℃～42℃下恒溫培養(yǎng)6～7小時；

3)在培養(yǎng)后的菌體懸液中加入包含發(fā)光試劑底物、大腸菌群溫和裂解液的發(fā)光檢測試劑進行發(fā)光值檢測，根據(jù)發(fā)光值判斷大腸菌群數(shù)量；

所述增菌增酶培養(yǎng)液包括以體積比100∶1混合的組分A、組分B，組分A為：每1000ml蒸餾水中含有胰蛋白胨0.5～2g，氯化鈉2～5g，磷酸二氫鉀6～8g，氫氧化鈉1～2g，組分B為：每100mL蒸餾水中含有β-半乳糖苷酶誘導(dǎo)物0.05～0.2g，亞致死細菌快速修復(fù)物3～6g，細菌快速增長劑2～5g。本技術(shù)方案中，通過步驟1)對樣品進行前處理，使樣品中的菌體分離富集，去除影響檢測的干擾物；通過步驟2)，對分離得到的菌體進行增菌增酶培養(yǎng)因此又加入一能有效誘導(dǎo)β-半乳糖苷酶表達的物質(zhì)，使菌體快速增殖的同時，β-半乳糖苷酶也得到高效表達，從而提高檢測速率。

其中，所述β-半乳糖苷酶誘導(dǎo)物為乳糖、異丙基硫代半乳糖苷或者半乳糖中的任一種。

其中，所述亞致死細菌快速修復(fù)物為甘油、葡萄糖、丙酮酸鈉、抗壞血酸、維生素E中的任一種或多種。

其中，所述細菌快速增長劑為三磷酸腺苷、肌酐，肌苷或者牛血清提取物中的任一種或多種。

其中，組分A中還包括自由基清除劑1g～3g、十二烷基磺酸鈉0.03g～0.06g。

其中，所述自由基清除劑為活性炭、可溶性淀粉、半胱氨酸、二苯胺、巰基乙醇或α-生育酚中的任一種。

其中，所述發(fā)光檢測試劑包括發(fā)光試劑底物、發(fā)光增強劑、大腸菌溫和裂解液。

其中，所述大腸菌溫和裂解液為細胞膜破壞試劑，所述細胞膜破壞劑為EDTA、Nisin、Tween-80、硫酸粘菌素B、曲拉通、CATB中的任一種。

其中，所述發(fā)光試劑底物為AMPGD、銪試劑、熒光素-β-半乳糖苷中的任一種。

其中，所述發(fā)光增強劑為季銨鹽高聚物。

其中，步驟1)中，所述菌體分離富集為：將樣品利用無菌生理鹽水稀釋5～40倍，用真空過濾法濾過30μm聚丙烯濾膜，取濾后液過0.2-0.45μm混合醋酸纖維素濾膜，再利用20～50ml無菌生理鹽水洗滌2-3次，菌體截留在混合醋酸纖維素濾膜上。

其中，組分A在121℃下滅菌15分鐘后再與組分B混合。

其中，步驟3)中的發(fā)光值檢測為：將50μl～100μl的增菌增酶培養(yǎng)后的菌體懸液與50～100μl發(fā)光檢測試劑反應(yīng)10～50分鐘，利用發(fā)光光度計于530nm～590nm處檢測發(fā)光值，將檢樣發(fā)光值與陰性對照樣發(fā)光值比對。

本發(fā)明的食品中大腸菌群的快速檢測方法具有如下優(yōu)點：