[發明專利]食品中大腸菌群的快速檢測方法

有效

• 申請號: 201010173224.4
• 申請日: 2010-05-11
• 公開（公告）號: CN101831485A
• 公開（公告）日: 2010-09-15
• 發明（設計）人: 嚴守雷;繆素娜;鄧少雅;吳俊;黃文彪;潘思軼
• 申請（專利權）人: 佛山市海天調味食品有限公司;佛山市海天(高明)調味食品有限公司
• 主分類號: C12Q1/34
• 分類號: C12Q1/34;C12Q1/10;C12Q1/06;G01N21/76
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 曹志霞;李贊堅

1.一種食品中大腸菌群的快速檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)對樣品進行菌體分離富集，去除干擾物；

2)將分離的菌體懸浮于增菌增酶培養液中，在39℃～42℃下恒溫培養6～7小時；

3)在培養后的菌體懸液中加入發光檢測試劑進行發光值檢測，根據發光值判斷大腸菌群數量；

所述增菌增酶培養液包括以體積比100∶1混合的組分A、組分B，組分A為：每1000ml蒸餾水中含有胰蛋白胨0.5～2g，氯化鈉2～5g，磷酸二氫鉀6～8g，氫氧化鈉1～2g，組分B為：每100mL蒸餾水中含有β-半乳糖苷酶誘導物0.05～0.2g，亞致死細菌快速修復物3～6g，細菌快速增長劑2～5g。

2.如權利要求1的食品中大腸菌群的快速檢測方法，其特征在于，所述β-半乳糖苷酶誘導物為乳糖、異丙基硫代半乳糖苷或者半乳糖中的任一種。

3.如權利要求1的食品中大腸菌群的快速檢測方法，其特征在于，所述亞致死細菌快速修復物為甘油、葡萄糖、丙酮酸鈉、抗壞血酸、維生素E中的任一種或多種。

4.如權利要求1的食品中大腸菌群的快速檢測方法，其特征在于，所述細菌快速增長劑為三磷酸腺苷、肌酐，肌苷或者牛血清提取物中的任一種或多種。

5.如權利要求1的食品中大腸菌群的快速檢測方法，其特征在于，組分A中每1000ml蒸餾水中還含有自由基清除劑1g～3g、十二烷基磺酸鈉0.03g～0.06g。

6.如權利要求5的食品中大腸菌群的快速檢測方法，其特征在于，所述自由基清除劑為活性炭、可溶性淀粉、半胱氨酸、二苯胺、巰基乙醇或α-生育酚中的任一種。

7.如權利要求1的食品中大腸菌群的快速檢測方法，其特征在于，所述發光檢測試劑包括發光試劑底物、發光增強劑、大腸菌溫和裂解液。

8.如權利要求7的食品中大腸菌群的快速檢測方法，其特征在于，所述大腸菌溫和裂解液為細胞膜破壞試劑，所述細胞膜破壞劑為EDTA、Nisin、Tween-80、硫酸粘菌素B、曲拉通、CATB中的任一種。

9.如權利要求7的食品中大腸菌群的快速檢測方法，其特征在于，所述發光試劑底物為AMPGD、銪試劑、熒光素-β-半乳糖苷中的任一種。

10.如權利要求7的食品中大腸菌群的快速檢測方法，其特征在于，所述發光增強劑為季銨鹽高聚物。

11.如權利要求1的食品中大腸菌群的快速檢測方法，其特征在于，步驟1)中，所述菌體分離富集為：將樣品利用無菌生理鹽水稀釋5～40倍，用真空過濾法濾過30μm聚丙烯濾膜，取濾后液過0.2-0.45μm混合醋酸纖維素濾膜，再利用20～50ml無菌生理鹽水洗滌2-3次，菌體截留在混合醋酸纖維素濾膜上。

12.如權利要求1的食品中大腸菌群的快速檢測方法，其特征在于，組分A在121℃下滅菌15分鐘后再與組分B混合。

13.如權利要求1的食品中大腸菌群的快速檢測方法，其特征在于，步驟3)中的發光值檢測為：將50μl～100μl的增菌增酶培養后的菌體懸液與50～100μl發光檢測試劑反應10～50分鐘，利用發光光度計于530nm～590nm處檢測發光值，將檢樣發光值與陰性對照樣發光值比對。