[發(fā)明專利]用于測量大鼠血清總IgE的放射免疫分析試劑盒及其檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010172353.1
• 申請日: 2010-05-12
• 公開（公告）號: CN102243229A
• 公開（公告）日: 2011-11-16
• 發(fā)明（設計）人: 張彤;鐘高仁;林敏;金若敏;李秀芳;韓向東;徐培康
• 申請（專利權(quán)）人: 上海中醫(yī)藥大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543
• 代理公司: 上海浦一知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31211
• 代理人: 潘詩孟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種檢測大鼠血清總IgE含量的放射免疫分析試劑盒，特別涉及一種基于偶聯(lián)羊抗兔IgG磁性納米粒子制備方法；本發(fā)明還涉及一種大鼠血清總IgE含量放射免疫檢測方法。

背景技術(shù)

過敏是現(xiàn)代社會中最常見的一種疾病，它是由不同種過敏原引發(fā)的。我國大約5～10％，美國和歐洲約有5～25％的人受過過敏性疾病的侵擾，其中幼兒和青少年的病癥尤為明顯，威脅較為嚴重。過敏反應(allergic?reaction)又稱變態(tài)反應，過敏原(allergen)又稱變應原。根據(jù)歐洲過敏和臨床免疫學學會(European?Academy?of?Allergy?and?Clinical?Immunology，EAACI)發(fā)表的觀點，免疫介導的過敏反應有兩種類型：IgE介導的過敏反應和非IgE介導的過敏反應(Johansson?SGO.et?al，2001，Allergy，56：813-824)。IgE介導的過敏反應是過敏原刺激抗體的淋巴、肝、脾等器官的單核吞噬系統(tǒng)，觸發(fā)漿細胞反應產(chǎn)生特異性IgE(sIgE)抗體。IgE分子的Fc端附著在肥大細胞或嗜堿性粒細胞的IgE受體上，使機體處于致敏狀態(tài)。當機體再受同類型過敏原刺激時，過敏原使IgE分子交聯(lián)，引起肥大細胞或嗜堿性粒細胞脫顆粒化，釋放出組胺、白三烯及細胞因子等化學物質(zhì)產(chǎn)生過敏反應導致機體的毛細血管擴張、水腫平滑肌痙攣內(nèi)分泌活動亢進、引發(fā)過敏性疾病的臨床癥狀，如：花粉癥、過敏性鼻炎過敏性哮喘、過敏性休克、蕁麻疹、濕疹、血管性水腫、關(guān)節(jié)炎、頭痛、腸胃功能失調(diào)及其他慢性癥狀。

IgE介導的過敏反應的致敏原檢測在臨床上可以通過皮膚敏感試驗及血清IgE抗體的體外測量，結(jié)合病史、病癥的問診來確定致敏的致敏原。皮膚敏感試驗一般是將低濃度、低劑量的過敏物質(zhì)注射至皮下組織，以觀察其過敏反應。雖然皮膚敏感試驗準確性高且成本低，但因需要皮下注射多次，操作性較差，且容易使受測者感到不適和恐懼，此外，還存在易產(chǎn)生偽陽性反應而造成誤判，以及因直接注射過敏原而造成過敏性休克的危險。

血清IgE抗體的體外免疫學檢測方法很多，其中有放射免疫吸附劑試驗(radioimmunobsorbent?test，RIST)、酶聯(lián)免疫吸附分析法(enzyme-linked?immunosorbentassay，ELISA)、熒光酶聯(lián)免疫吸附試驗(fluorescent?enzyme-linked?immunosorbent?assay，F(xiàn)EIA)等，不同方法各有優(yōu)缺點。

中藥注射制劑的過敏反應是其不良反應主要形式之一，這可能意味著臨床前有必要在動物體內(nèi)進行致敏原的試驗，以測試中藥注射制劑的過敏反應程度。然而，目前尚缺乏有針對性地測量中藥注射制劑致敏原的試驗方法(包括動物試驗和判定指標)。由于中藥注射制劑的致敏原成分復雜，可能制劑中的雜質(zhì)，也可能中藥有效成分本身是個半抗原。目前通常采用豚鼠為實驗動物晶形致敏反應實驗，但致敏反應的一個重要指標血清IgE抗體的含量可能不是在致敏原攻擊之后達到最高。一個改進方法是應用大鼠(特別是BN大鼠)進行過敏反應研究，這樣可在致敏后不同時間取血清，通過測量不同時間的血清中IgE抗體的量，了解致敏反應的程度(而豚鼠不能多天取血清)。

目前測量大鼠血清中的IgE抗體的體外免疫學分析藥盒不多見，就是有均為進口，購買時間長，而且價格昂貴。為更有利于開展中藥注射制劑致敏原的研究，建立測量大鼠血清總IgE的放射免疫分析試劑盒是很有必要的。放射免疫法檢測IgE，雖由于放射性的問題妨礙其發(fā)展和廣泛應用，但其測定重復性好，目前仍在研究單位應用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是建立一種靈敏度高的測量大鼠血清總IgE的放射免疫分析方法，并提供一種測量大鼠血清總IgE的放射免疫分析試劑盒。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種用于測量大鼠血清總IgE的放射免疫分析試劑盒，該試劑盒以偶聯(lián)羊抗兔IgG磁性納米粒子作為分離劑。

優(yōu)選地，本發(fā)明上述分析試劑盒中還包括本領(lǐng)域技術(shù)人員進行測量大鼠血清總IgE放射免疫分析所用的其它常規(guī)試劑，如標準溶液由大鼠IgE配置，標記物溶液為¹²⁵I標記大鼠IgE，抗血清溶液為兔抗大鼠IgE的抗血清，質(zhì)控樣品由已知大鼠血清樣品配制。

優(yōu)選地，本發(fā)明上述偶聯(lián)羊抗兔IgG磁性納米粒子的制備方法包括如下步驟：