[發(fā)明專利]用于測量大鼠血清總IgE的放射免疫分析試劑盒及其檢測方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010172353.1
• 申請(qǐng)日: 2010-05-12
• 公開（公告）號(hào): CN102243229A
• 公開（公告）日: 2011-11-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張彤;鐘高仁;林敏;金若敏;李秀芳;韓向東;徐培康
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海中醫(yī)藥大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/543
• 分類號(hào): G01N33/543
• 代理公司: 上海浦一知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31211
• 代理人: 潘詩孟

1.一種用于檢測大鼠血清總IgE含量的放射免疫分析試劑盒，其特征是，其磁分離劑為偶聯(lián)羊抗兔IgG磁性納米粒子。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的放射免疫分析試劑盒，其特征是，標(biāo)準(zhǔn)溶液由大鼠IgE配置；標(biāo)記物溶液為¹²⁵I標(biāo)記大鼠IgE；抗血清溶液為兔抗大鼠IgE的抗血清；質(zhì)控樣品由已知大鼠血清樣品配制。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的放射免疫分析試劑盒，其特征是，偶聯(lián)羊抗兔IgG磁性納米粒子的制備方法包括下列步驟：

①.采用堿性化學(xué)共沉淀法，制備粒徑＜100nm，比飽和磁化強(qiáng)度為25～50emu/g，具有超順磁性的Fe₃O₄納米粒子；

②.以γ-氨丙基三乙氧基硅烷對(duì)Fe₃O₄納米粒子進(jìn)行表面改性，在其表面引入氨基，制備得到粒徑＜100nm，比飽和磁化強(qiáng)度為25～50emu/g的硅氨化的Fe₃O₄納米粒子；

③.選用碳二亞胺為偶聯(lián)劑，在N-羥基琥珀酰亞胺存在的條件下，把IgG偶聯(lián)到硅氨化的Fe₃O₄納米粒子表面。

4.如權(quán)利要求3所述的放射免疫分析試劑盒，其特征是，步驟①中，投料反應(yīng)前，用去離子水分別配制濃度為1.7～2.3mol/L的FeCl₂·4H₂O和FeCl₃·6H₂O水溶液；按摩爾比F²⁺/Fe³⁺＝1/1.5～1/2.2加入通有氮?dú)獾姆磻?yīng)瓶中，水浴中攪拌升溫至50～60℃后，滴加氨水使溶液維持pH＝10～11，停止滴加氨水，再升溫至80℃，并繼續(xù)攪拌0.5～1.5h；反應(yīng)結(jié)束后，自然冷卻到室溫，產(chǎn)生的黑色Fe₃O₄磁性納米粒子經(jīng)蒸餾水反復(fù)洗至中性，真空干燥后，即得比飽和磁化強(qiáng)度為25～50emu/g?Fe₃O₄，具有超順磁性的Fe₃O₄納米粒子。

5.如權(quán)利要求3所述的放射免疫分析試劑盒，其特征是，步驟②中，稱取步驟①得到的Fe₃O₄納米粒子0.3～0.8g于反應(yīng)瓶中，加入100ml乙醇和1～3ml蒸餾水，超聲20～40min；反應(yīng)液在水浴中攪拌升溫至50～60℃后，滴加0.5～2mlγ-氨丙基三乙氧基硅烷，并保持50～60℃下繼續(xù)攪拌4～6h，產(chǎn)生的硅氨化Fe₃O₄磁性納米粒子經(jīng)乙醇反復(fù)洗至中性，真空干燥，得到比飽和磁化強(qiáng)度為25～50emu/g的硅氨化的Fe₃O₄納米粒子。

6.如權(quán)利要求3所述的放射免疫分析試劑盒，其特征是，步驟③中，稱取步驟②得到的硅氨化的Fe₃O₄納米粒子0.3～0.8g于反應(yīng)瓶中，加入15～25ml的0.1mol/L，pH?5.4緩沖液，分別加入NHS和EDC，室溫下攪拌反應(yīng)2h后，用磁分離出已經(jīng)活化的Fe₃O₄磁性納米粒子；再加入15～25ml的0.1mol/L，pH?5.4緩沖液，加入羊抗兔IgG，并4℃下攪拌反應(yīng)過夜；產(chǎn)生的偶聯(lián)有IgG的Fe₃O₄納米粒子經(jīng)0.01mol/L，pH?7.4磷酸緩沖液反復(fù)磁分離洗5次，用2.5％的明膠封閉后，再用0.5％的吐溫-20的0.01mol/L，pH?7.4磷酸緩沖液配置，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

7.一種大鼠血清總IgE含量的檢測方法，使用權(quán)利要求1-6任何一項(xiàng)所述的放射免疫分析試劑盒，在若干放射免疫管中分別加入待測樣品、IgE標(biāo)準(zhǔn)溶液和質(zhì)量控制樣品，然后對(duì)每一放射免疫管，分別進(jìn)行如下操作：

1)加入兔抗大鼠IgE的抗血清；

2)加入¹²⁵I標(biāo)記大鼠IgE，混勻；

3)4℃下放置過夜，或37±2℃1hr溫育；

4)加入偶聯(lián)有IgG的Fe₃O₄磁性納米粒子，振蕩搖勻；

5)將放射免疫管放置在磁分離器的管架上，連接磁分離器底部磁鐵15～30min，再移走磁鐵；

6)倒出溶液后測沉淀放射性計(jì)數(shù)；

7)計(jì)算各管的結(jié)合率，作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)算出待測樣品的含量。