[發(fā)明專利]禽IL-2與新城疫病毒HN基因重組融合蛋白及其應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010172224.2
• 申請(qǐng)日: 2010-05-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101870733A
• 公開(kāi)（公告）日: 2010-10-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張春杰;王臣;程相朝;李銀聚;吳庭才;劉一塵;丁軻;余祖華;趙戰(zhàn)勤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K19/00
• 分類號(hào): C07K19/00;C12N15/62;C12N15/81;C12N1/19;A61K39/39;A61K39/17;A61P31/14;C12R1/84
• 代理公司: 鄭州睿信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛(ài)周

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及涉及禽白細(xì)胞介素-2（Interleukin-2，IL-2）與新城疫病毒HN融合蛋白，及編碼該融合蛋白的DNA序列以及含該DNA序列的載體和宿主細(xì)胞，還涉及重組融合蛋白及其應(yīng)用，屬于生物技術(shù)制藥工業(yè)中的基因工程生產(chǎn)疫苗和免疫佐劑的技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

新城疫(Newcastledisease,ND)是由新城疫病毒（Newcastlediseasevirus,NDV）引起禽類的一種以呼吸困難、拉黃綠色稀便、神經(jīng)機(jī)能紊亂和粘膜、漿膜出血為主要特征的高度接觸性、急性敗血性傳染病。被國(guó)際獸疫局列為對(duì)動(dòng)物危害最大的A類傳染病之一，給養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失。雞新城疫由于ND發(fā)病率和死亡率都很高，是威脅養(yǎng)禽業(yè)的頭號(hào)疾病，對(duì)該病的控制成功與否直接決定了養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展趨勢(shì)。

NDV-HN基因編碼的HN蛋白在NDV致病過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。HN蛋白即血凝素-神經(jīng)氨酸酶蛋白，是NDV除F糖蛋白之外另一種較大的糖蛋白,也為病毒的主要宿主保護(hù)性抗原。HN具有HA和NA兩種活性，一是吸附細(xì)胞表面含唾液酸的受體；另一種是由NA催化裂解唾液酸受體，這兩種活性在病毒侵染細(xì)胞過(guò)程中起著識(shí)別細(xì)胞受體、介導(dǎo)病毒吸附細(xì)胞膜的重要作用。HN蛋白是誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和性抗體的主要病毒蛋白，在機(jī)體抗感染免疫中起著重要作用，用基因工程表達(dá)的HN蛋白具有良好的免疫原性，免疫雞后能產(chǎn)生較高水平的特異性抗體，對(duì)強(qiáng)毒攻擊有很好的保護(hù)作用。

在新城疫免疫預(yù)防中常規(guī)使用的疫苗主要有各種不同毒力的弱毒疫苗和油乳劑滅活疫苗。但傳統(tǒng)新城疫滅活疫苗的共同特性是能誘導(dǎo)強(qiáng)烈的體液免疫應(yīng)答，而細(xì)胞免疫反應(yīng)則相對(duì)軟弱。在新城疫的抗感染免疫中，抗體反應(yīng)對(duì)于機(jī)體抵抗病毒的感染是必需的，但不能阻止病毒的傳播。因而，近年來(lái)隨著分子生物學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，NDV基因工程疫苗的研制已成為人們研究的熱點(diǎn)，但基因工程疫苗在誘導(dǎo)機(jī)體免疫反應(yīng)方面還存在一些不盡如人意之處，動(dòng)物保護(hù)實(shí)驗(yàn)效果不夠理想。因此，研究者試圖從多方面增強(qiáng)NDV疫苗的免疫效果，其中用細(xì)胞因子作為分子免疫佐劑，已引起研究者的關(guān)注。

白細(xì)胞介素-2（Interleukin-2，IL-2）是由T淋巴細(xì)胞分泌的一種淋巴因子，能促進(jìn)T細(xì)胞、B細(xì)胞的增殖和分化，并可增強(qiáng)單核細(xì)胞以及NK細(xì)胞的殺傷活性，在免疫應(yīng)答反應(yīng)過(guò)程中起著重要的調(diào)節(jié)作用。研究發(fā)現(xiàn)，IL-2能特異性誘導(dǎo)機(jī)體細(xì)胞免疫，非特異作用于機(jī)體體液免疫，與抗原物質(zhì)混合使用，可使機(jī)體提前產(chǎn)生免疫力，降低應(yīng)激反應(yīng)，減少免疫損害，延長(zhǎng)有效抗體維持時(shí)間，是一種天然的免疫增強(qiáng)劑。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種具有良好免疫效果的chIL-2-HN融合蛋白。

本發(fā)明的目的還在于提供一種編碼該融合蛋白的DNA序列。

本發(fā)明的目的還在于提供一種含該DNA序列的載體以及宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的目的還在于提供一種以畢赤酵母菌為宿主細(xì)胞的基因工程chIL-2-HN融合蛋白的制備方法。

另外，本發(fā)明的目的還在于提供一種該融合蛋白在雞新城疫防治中的應(yīng)用。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案采用了一種chIL-2-HN融合蛋白，包括禽白細(xì)胞介素2（chIL-2）的氨基酸序列、新城疫病毒血凝素-神經(jīng)氨酸酶（HN蛋白）的氨基酸序列、以及位于禽白細(xì)胞介素2氨基酸序列和新城疫病毒HN蛋白的氨基酸序列之間的柔性Linker肽氨基酸序列；由禽白細(xì)胞介素2（chIL-2）基因和雞新城疫病毒HN基因通過(guò)柔性Linker肽（G-G-G-G-S）串聯(lián)連接而成。

該蛋白具有SEQIDNO.7所示的氨基酸序列。

所述的柔性Linker肽具有SEQIDNO.6所示的氨基酸序列。

同時(shí)，本發(fā)明的技術(shù)方案還采用了一種分離的DNA序列，編碼具有序列為SEQIDNO.7所示的氨基酸序列的融合蛋白。

該DNA序列具有SEQIDNO.5所示的核苷酸序列。

本發(fā)明的技術(shù)方案還采用了一種重組畢赤酵母載體和宿主細(xì)胞，它含有具有SEQIDNO.5所示的核苷酸序列的DNA序列。

重組融合蛋白在雞新城疫預(yù)防和治療中的應(yīng)用。

具體地：本發(fā)明的chIL-2-HN融合蛋白及其DNA序列如下：