[發明專利]一種番石榴焦腐病菌分子檢測引物及其檢測方法

無效

• 申請號: 201010169775.3
• 申請日: 2010-04-24
• 公開（公告）號: CN101864484A
• 公開（公告）日: 2010-10-20
• 發明（設計）人: 陳慶河;翁啟勇;高新明;李本金;蘭成忠
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

1.一種用于番石榴焦腐病菌分子檢測的PCR引物，引物序列為：

上游引物BF1：5′-TCCGGCCGCCAAAGGACC-3′

下游引物BR1：5′-TCTTTGAGGCGCGTCCGCA-3′。

2.一種利用權利要求1所述PCR引物檢測番石榴焦腐病菌的方法，包括：

(1)從發病的番石榴植物組織中采用CTAB法提取DNA；

(2)以提取的DNA為模板用權利要求1所述的一對引物BF1/BR1通過PCR擴增；PCR反應體系25μl，包括2.5μl?10×PCR反應緩沖液，2.0mmol/L?Mg²⁺，50μmol/L?dNTPs，1.25U?TaqDNA聚合酶，引物BF1/BR1各0.5μmol/L和10ng模板DNA，ddH₂O補足25μl；PCR反應條件為：95℃預變性1min，94℃變性30sec，60℃退火30sec，72℃延伸1min共30個循環；72℃延伸10min；

(3)然后取步驟(2)的PCR擴增產物用瓊脂糖電泳分離，經溴化乙錠染色后于紫外燈下觀察，根據擴增產物的大小判定結果；如果能特異性地擴增出287bp的產物，即可判斷所述的植物組織中存在了番石榴焦腐病菌。