[發明專利]一種尖吻蝮蛇蛇毒類凝血酶的制備方法無效
| 申請號： | 201010166710.3 | 申請日： | 2010-05-10 |
| 公開（公告）號： | CN102242103A | 公開（公告）日： | 2011-11-16 |
| 發明（設計）人： | 薛百忠;李小軍;王宏英;薛雁;李秀林;丁忠福;薄學軍 | 申請（專利權）人： | 遼寧諾康醫藥有限公司 |
| 主分類號： | C12N9/64 | 分類號： | C12N9/64 |
| 代理公司： | 沈陽晨創科技專利代理有限責任公司 21001 | 代理人： | 張晨 |
| 地址： | 110000 遼寧*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 蝮蛇 蛇毒 凝血酶 制備 方法 | ||
1.一種尖吻蝮蛇蛇毒類凝血酶的制備方法，其特征在于：在常溫下，從尖吻蝮蛇蛇毒中提取類血凝酶的步驟為：
(1)、尖吻蝮蛇蛇毒用緩沖液浸泡、溶解過夜，離心去除沉淀，得上清液；
(2)、蛇毒上清液經DEAE-Sephadex?A-50離子交換層析，上樣結束后，用pH7.5的Tris-HCl緩沖溶液進行洗脫，紫外檢測儀280nm檢測，至讀數達到基線后，再用pH7.5含0～0.1M?NaCL的Tris-HCl緩沖溶液梯度洗脫，紫外檢測儀280nm檢測，收集活性峰，目的類凝血酶為第4峰；
(3)、第4峰用pH8.0的Tris-HCl緩沖溶液透析；
(4)、透析后樣品經Q-Sepharos離子交換層析，上樣結束后，用pH8.0的Tris-HCl緩沖溶液進行洗脫，紫外檢測儀280nm檢測，至讀數達到基線后，再用pH8.0含0～0.1M?NaCL的Tris-HCl緩沖溶液梯度洗脫，紫外檢測儀280nm檢測，收集活性峰，目的類凝血酶為第3峰；
(5)、第3峰用pH7.5的Tris-HCl緩沖溶液透析；
(6)、透析后樣品經陰離子葡聚糖凝膠層析，上樣結束后，用pH7.5的Tris-HCl緩沖溶液進行洗脫，紫外檢測儀280nm檢測，至讀數達到基線后，再用pH7.5含0～0.1M?NaCL的Tris-HCl緩沖溶液梯度洗脫，紫外檢測儀280nm檢測，收集掛柱峰，得到單一成份的尖吻蝮蛇蛇毒類凝血酶。
2.按照權利要求1所述尖吻蝮蛇蛇毒類凝血酶的制備方法，特征在于：所述步驟(1)中的緩沖溶液是pH7.5的Tris-HCl緩沖溶液。
3.按照權利要求1所述尖吻蝮蛇蛇毒類凝血酶的制備方法，其特征在于：所述步驟(2)中DEAE-Sephadex?A-50離子交換層析柱所選擇的流速為3.0mL/min。
4.按照權利要求1所述尖吻蝮蛇蛇毒類凝血酶的制備方法，其特征在于：所述步驟(3)中第4峰需用pH8.0的Tris-HCl緩沖溶液透析至少三次，使類凝血酶粗提液接近pH8.0。
5.按照權利要求1所述尖吻蝮蛇蛇毒類凝血酶的制備方法，其特征在于：所述步驟(4)中Q-Sepharos離子交換層析柱所選擇的流速為2.0mL/min。
6.按照權利要求1所述尖吻蝮蛇蛇毒類凝血酶的制備方法，其特征在于：所述步驟(5)中第3峰需用pH7.5的Tris-HCl緩沖溶液透析至少三次，使類凝血酶粗提液接近pH7.5。
7.按照權利要求1所述尖吻蝮蛇蛇毒類凝血酶的制備方法，其特征在于：所述步驟(6)中陰離子葡聚糖凝膠層析柱所選擇的流速為2.0mL/min。
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