[發明專利]改造的角化細胞生長因子基因及其在酵母中的表達

有效

• 申請號: 201010166361.5
• 申請日: 2010-05-10
• 公開（公告）號: CN102242124A
• 公開（公告）日: 2011-11-16
• 發明（設計）人: 王晶翼;李劍鳳;艾麗靜;王希菊;劉克玲;宮新江;王慶民;孫麗霞
• 申請（專利權）人: 齊魯制藥有限公司
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/63;C12N1/19;A61K38/18;A61P35/00;C12R1/84
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219
• 代理人: 趙會祥

1.一種編碼角化細胞生長因子的基因片段，它具有如SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列。

2.一種含有SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列的表達載體。

3.一種畢赤酵母，其特征在于，該畢赤酵母含有如權利要求2所述的表達載體。

4.一種如權利要求3所述的畢赤酵母的構建方法，該方法包括：(1)利用XhoI和EcoRI雙酶切合成的角化細胞生長因子，構建重組質粒X-KGF；(2)轉化畢赤酵母感受態細胞，通過抗性平板篩選獲得陽性轉化子；(3)利用搖瓶發酵對陽性轉化子進行進一步篩選；

所述步驟(1)中的重組質粒X-KGF，X代表選擇的表達質粒。

5.如權利要求4所述的畢赤酵母的構建方法，其特征在于，步驟(1)所述構建重組質粒X-KGF是指利用核酸限制性內切酶XhoI和EcoRI雙酶切合成的角化細胞生長因子，克隆到相同酶切的表達質粒X上，然后進行測序驗證。

6.如權利要求4所述的畢赤酵母的構建方法，其特征在于，步驟(2)是將步驟(1)中構建的重組質粒X-KGF和空白對照質粒，轉化畢赤酵母感受態細胞，根據抗生素抗性或遺傳缺陷型，通過平板篩選獲得相應陽性畢赤酵母轉化子；優選的，所述畢赤酵母感受態細胞，是畢赤酵母工程菌株GS115、KM71、SMD1168或X-33的感受態細胞。

7.如權利要求4所述的畢赤酵母的構建方法，其特征在于，步驟(3)所述方法是將步驟(2)中獲得的陽性轉化子在培養基中進行搖瓶發酵篩選，獲得表達細胞株。

8.如權利要求4所述的畢赤酵母的構建方法，其特征在于，步驟(3)所述重組質粒X-KGF，其中表達質粒X是：pGAPZαA/B/C、pPICZαA/B/C、pPIC9或pPIC9K。

9.如權利要求4所述的畢赤酵母的構建方法，其特征在于，步驟(3)所述搖瓶發酵的培養基是BMMY、BMGY、YPD或FBS。

10.利用如權利要求3所述的畢赤酵母進行高密度發酵表達的角化細胞生長因子在制備抗癌藥物方面的應用。