[發明專利]基于聚合物微球變化的編碼檢測方法

無效

• 申請號: 201010165666.4
• 申請日: 2010-05-07
• 公開（公告）號: CN101846672A
• 公開（公告）日: 2010-09-29
• 發明（設計）人: 常津;李云紅;張琦;宋濤;逯超亮
• 申請（專利權）人: 天津大學
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/533;G01N33/576;G01N33/569;G01N33/571;G01N33/68;C12Q1/68
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 王麗

1.基于聚合物微球變化的編碼檢測方法，其特征在于采用表面偶聯特異性抗體、抗原、DNA或RNA片段的一系列不同粒徑和內部結構的聚合物微球，通過免疫反應或基因雜交反應特異性地識別待測樣品中的抗原、抗體、DNA或RNA片段；用表面攜帶熒光物質的分子探針與待測的抗體、抗原、DNA或RNA片段特異性偶聯，使得微球表面呈現熒光顏色；在檢測儀器中檢測熒光信號，與陰性和陽性對照標本或已知濃度的標準品對比，判斷待測樣品是陰性或是陽性；在檢測儀器中對微球粒徑和內部結構進行表征，根據微球粒徑和內部結構與檢測信息的一一對應關系，從而對待測物質進行準確判斷。

2.如權利要求1所述編碼檢測方法的聚合物微球，其特征在于聚合物微球是不同交聯度的致密微球、介孔或微孔球；微球的粒徑為2～30μm，相鄰編碼微球粒徑間隔在1～10μm。

3.如權利要求2所述的聚合物微球，其特征在于聚合物微球微球的粒徑優選4～16μm。

4.如權利要求2或3所述的聚合物微球，其特征在于聚合物微球為聚苯乙烯類微球、聚丙烯酸酯類微球、聚苯乙烯-丙烯酸共聚微球或聚甲基丙烯酸甲酯-丙烯酸共聚微球，分散系數低于15％。

5.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于微球表面帶有氨基、羧基或氯甲基官能團，表面官能團負載率為0.5～1.5mmol/g；與蛋白或基因結合成為診斷微球，從而建立不同微球與不同蛋白或基因的一一對應關系。

6.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述的抗體、抗原、DNA或RNA片段是抗結核桿菌抗體、抗乙肝病毒抗體抗微生物抗體中的一種或幾種；類風濕因子、抗甲狀腺球蛋白抗體自身抗體中的一種或幾種；抗小鼠抗體、抗兔二抗第二抗體中的一種或幾種；小鼠血清、兔血清動物血清抗原類中的一種或幾種；豬流感病毒NS₁基因、胰島素基因微生物體內的特異基因、人體或動物體內基因的轉錄產物其中的一種或幾種。

7.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于表面偶聯抗體的編碼微球和熒光標記的同種抗體，對應檢測待測樣品中的抗原；表面偶聯抗原的編碼微球和熒光標記的同種抗原，對應檢測待測樣品中的抗體；表面偶聯DNA片段或RNA片段的編碼微球和熒光標記相同的DNA或RNA片段，對應檢測待測樣品中的DNA或RNA片段。

8.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于檢測儀器是分辨聚合物微球不同粒徑和致密與介孔微球的散射光信號。

9.如權利要求8所述的檢測方法，其特征在于所述的檢測儀器為流式細胞儀，流式細胞儀檢測信號的變異系數在20％以下；前向角散射光信號最小分辨尺寸為0.3μm；側向角散射光信號反映微球密微球與介孔微球的散射信號強；將檢測信號檢轉化為直觀顯示的一維直方圖和二維散點圖，以精確識別不同微球，通過一一對應的關系確定待測物質的信息。