[發(fā)明專利]一種針對(duì)一個(gè)或多個(gè)目標(biāo)基因組區(qū)域進(jìn)行邊擴(kuò)增邊連接的方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201010163648.2 | 申請(qǐng)日： | 2007-08-15 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN101824412A | 公開(kāi)（公告）日： | 2010-09-08 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 張秀清;蘇夜陽(yáng);林琳;汪建;楊煥明 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 北京華大基因研究中心 |
| 主分類號(hào)： | C12N15/11 | 分類號(hào)： | C12N15/11;C12N15/10;C12Q1/68;C40B50/06 |
| 代理公司： | 中國(guó)國(guó)際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所 11038 | 代理人： | 程泳 |
| 地址： | 101300 北京*** | 國(guó)省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 針對(duì) 一個(gè) 目標(biāo) 基因組 區(qū)域 進(jìn)行 擴(kuò)增 連接 方法 | ||
1.一種針對(duì)一個(gè)目標(biāo)基因組區(qū)域進(jìn)行邊擴(kuò)增邊連接的方法，包 括步驟：
1)針對(duì)一個(gè)目標(biāo)基因組區(qū)域，設(shè)計(jì)包含公用接頭 GTAAAACGACGGCCAGT和ACTGGCCGTCGTTTTAC的用于多核苷酸擴(kuò)增反應(yīng) 的正向和反向引物，其中正向和反向引物中公用接頭彼此反向互補(bǔ)； 所述正向和反向引物的公用接頭為GTAAAACGACGGCCAGT和 ACTGGCCGTCGTTTTAC，所述目標(biāo)基因組區(qū)域選自BRCA1和BRCA2的70 個(gè)外顯子；
2)利用步驟1)中所述正向和反向引物，通過(guò)第一輪多核苷酸 擴(kuò)增反應(yīng)，擴(kuò)增目標(biāo)基因組區(qū)域，得到在所述目標(biāo)基因組區(qū)域5’端 和3’端加入公用接頭GTAAAACGACGGCCAGT和ACTGGCCGTCGTTTTAC的 可連接性DNA片段；
3)步驟2)獲得的可連接性DNA片段，作為第二輪多核苷酸擴(kuò) 增反應(yīng)的模板進(jìn)行邊擴(kuò)增邊連接反應(yīng)；得到由步驟2)所得可連接性 DNA片段連接而成的長(zhǎng)鏈DNA。
2.一種針對(duì)兩個(gè)及兩個(gè)以上的多個(gè)目標(biāo)基因組區(qū)域進(jìn)行邊擴(kuò)增 邊連接的方法，包括步驟：
1)針對(duì)多個(gè)目標(biāo)基因組區(qū)域的每個(gè)區(qū)域，分別設(shè)計(jì)包含公用接 頭GTAAAACGACGGCCAGT和ACTGGCCGTCGTTTTAC的用于多核苷酸擴(kuò)增反 應(yīng)的正向和反向引物，其中每對(duì)正向和反向引物中公用接頭彼此反向 互補(bǔ)；所述正向和反向引物的公用接頭為GTAAAACGACGGCCAGT和 ACTGGCCGTCGTTTTAC，所述目標(biāo)基因組區(qū)域選自BRCA1和BRCA2的70 個(gè)外顯子；
2)利用步驟1)中所述正向和反向引物，通過(guò)第一輪多核苷酸 擴(kuò)增反應(yīng)，分別擴(kuò)增目標(biāo)基因組區(qū)域，得到在各個(gè)目標(biāo)基因組區(qū)域5’ 端和3’端加入公用接頭GTAAAACGACGGCCAGT和ACTGGCCGTCGTTTTAC 的不同可連接性DNA片段；
3)將步驟2)獲得的不同可連接性DNA片段進(jìn)行等量地混合，作 為第二輪多核苷酸擴(kuò)增反應(yīng)的模板進(jìn)行邊擴(kuò)增邊連接反應(yīng)；得到由步 驟2)所得不同的可連接性DNA片段按隨機(jī)連接順序連接而成的長(zhǎng)鏈 DNA。
3.一種建立針對(duì)一個(gè)目標(biāo)基因組區(qū)域序列重測(cè)序隨機(jī)DNA文庫(kù) 的方法，包括步驟：
1)針對(duì)一個(gè)目標(biāo)基因組區(qū)域，設(shè)計(jì)包含公用接頭 GTAAAACGACGGCCAGT和ACTGGCCGTCGTTTTAC的用于多核苷酸擴(kuò)增反應(yīng) 的正向和反向引物，其中正向和反向引物中公用接頭彼此反向互補(bǔ)；
所述正向和反向引物的公用接頭為GTAAAACGACGGCCAGT和 ACTGGCCGTCGTTTTAC，所述目標(biāo)基因組區(qū)域選自BRCA1和BRCA2的70 個(gè)外顯子；
2)利用步驟1)中所述正向和反向引物，通過(guò)第一輪多核苷酸 擴(kuò)增反應(yīng)，擴(kuò)增目標(biāo)基因組區(qū)域，得到在所述目標(biāo)基因組區(qū)域5’端 和3’端加入公用接頭GTAAAACGACGGCCAGT和ACTGGCCGTCGTTTTAC的 可連接性DNA片段；
3)步驟2)獲得的可連接性DNA片段作為第二輪多核苷酸擴(kuò)增 反應(yīng)的模板進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)；得到由步驟2)所得可連接性DNA片段連 接而成的長(zhǎng)鏈DNA；
4)將步驟3)所得的長(zhǎng)鏈DNA用DNA隨機(jī)打斷法打斷，得到隨 機(jī)DNA文庫(kù)。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于北京華大基因研究中心，未經(jīng)北京華大基因研究中心許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購(gòu)買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請(qǐng)聯(lián)系【客服】
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