[發明專利]SDS-PAGE法鑒別肉及肉制品中動物源性成份

無效

• 申請號: 201010162851.8
• 申請日: 2010-04-08
• 公開（公告）號: CN102213720A
• 公開（公告）日: 2011-10-12
• 發明（設計）人: 孫京新;黃明;周光宏;徐幸蓮;羅欣;董佩諭
• 申請（專利權）人: 青島農業大學;南京農業大學
• 主分類號: G01N33/561
• 分類號: G01N33/561;G01N33/12
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

一、技術領域

本發明涉及一種利用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法鑒別肉及肉制品中動物源性成份的方法，利用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法鑒別肉及肉制品中豬、牛、羊、雞、魚源性成份，屬于食品衛生檢驗領域，在食品衛生安全檢驗方面具有非常重要的意義。

二、背景技術

肉制品具有很高的營養價值，含有優質蛋白和多種必需氨基酸，是人類飲食中的重要食品。隨著人們膳食結構的不斷改變，肉類需求不斷增加，市場上也出現了很多假冒羊肉或牛肉等現象，比如有人在病死豬肉內摻入羊油或牛油，裝入塑料袋里冷凍后就變成了“羊肉卷”、“牛肉卷”。由于瘋牛病、口蹄疫、禽流感等疾病的發現和流行，使得食品中的動物源性成份受到嚴格限制，不少人甚至害怕吃牛肉、豬肉和雞肉等。此外，我國是一個多民族組成的國家，各種宗教習慣使得人們的飲食有所差異，對肉類的選擇具有一定的傾向性；同時，一些特殊人群如患有高血壓，脂肪肝等的患者對肉的選擇具有特殊性。因此，食品中動物源性成份的鑒別已成為一個特別受人關注的問題。

為了保護消費者的利益和進出口貿易的公平，對肉制品進行檢測具有重要的社會和經濟意義。傳統的肉品檢測采用感官檢驗和免疫學方法僅對其生鮮肉具有一定鑒別作用，但對加工處理的肉制品，由于其感官性狀，蛋白質成分和其它免疫原性物質被破壞，難以鑒別，這給肉制品的交易和進出口帶來了極大的不便。黃昆侖等人發明的專利(申請號：200710175520.6；公開號：CN101173316A)提供了一種雞肉、牛肉、豬肉和馬肉多重PCR快速檢測試劑盒的方法，該方法能夠快速鑒別動物源性成份，但不夠經濟實用。楊德吉等人發明的專利(申請號：200810243974.7；公開號：CN?101435001A)提供了一種利用微衛星標記技術鑒別肉制品中源性成份的方法，其通過提取DNA模版，設計特異性引物，建立PCR檢測方法，根據擴增產物片段大小及有無鑒定肉制品中動物源性成份，該方法能準確地鑒定肉制品的動物源性成份，但較繁瑣。隨著我國加入世界貿易組織，國際貿易量與日俱增。因此，建立一種快速、準確、簡便的動物源性成份鑒別的方法具有重大的意義。

SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳是目前應用最廣泛的電泳方法，該方法是對蛋白質進行量化、比較及特性鑒定的一種經濟、快速而且可重復的方法。該方法主要依據蛋白質的分子量對其進行分離鑒定。SDS與蛋白質的疏水部分相結合，破壞其折疊結構，并使其穩定地存在于一個廣泛的溶液中。SDS蛋白質復合物的長度與其分子量呈正比。由于在樣品介質和聚丙烯酰胺凝膠中加入離子去垢劑和強還原劑，蛋白質亞基的電泳遷移率主要取決于亞基分子量的大小，而電荷因素可以被忽略。SDS-PAGE因易于操作和廣泛的用途，成為許多研究領域中一種重要的分析技術。

三、發明內容

技術問題

本發明的目的在于針對食品安全衛生檢驗方面動物源性成份鑒別困難的問題，提供一種利用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳技術鑒別肉及肉制品中豬、牛、羊、雞、魚源性成份的方法。

技術方案

本發明提供一種利用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳技術鑒別肉及肉制品中豬、牛、羊、雞、魚源性成份的方法。該方法通過提取各種動物源性成份不同加熱溫度的可溶性蛋白，進行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，根據電泳圖譜鑒別肉制品中豬、牛、羊、雞、魚源性成份。

上述鑒別肉及肉制品中豬、牛、羊、雞、魚源性成份的方法為：

(1)肉制品中可溶性蛋白質的提取：

稱取去皮肌肉組織，每份2g(2cm×1cm×1cm)左右，共7份，其中一份置于室溫，其余6份分別置于50℃、60℃、70℃、80℃、90℃、100℃恒溫水浴中加熱3min，立即取出放于碾缽中，加入4℃預冷的0.5M?Tris-HCl緩沖液20ml，碾磨勻漿10min，直至溶液呈稀薄狀，轉移1ml處理好的樣品，8000r/min離心15min，吸取100μL離心后的上清液即為可溶性蛋白質。

(2)以可溶性蛋白質為供試樣品，進行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳：

制膠：分離膠濃度為12％，堆積膠濃度為5％，厚度為1mm。

上樣：取20μL供試樣品與5μL?5×樣品緩沖液在Eppendorf管中混合，用微量注射器吸取樣品10μL加入樣品孔底部，避免混入氣泡。

電泳：將電泳槽放置于4℃環境中進行電泳，調節堆積膠電泳電壓為80V，電流為100mA，當樣品呈一條直線，接近分離膠時，將分離膠電泳電壓調至120V，電流100mA，觀察藍色條帶接近于分離膠底部時，停止電泳。

(3)電泳結果檢測：