[發明專利]SDS-PAGE法鑒別肉及肉制品中動物源性成份

無效

• 申請號: 201010162851.8
• 申請日: 2010-04-08
• 公開（公告）號: CN102213720A
• 公開（公告）日: 2011-10-12
• 發明（設計）人: 孫京新;黃明;周光宏;徐幸蓮;羅欣;董佩諭
• 申請（專利權）人: 青島農業大學;南京農業大學
• 主分類號: G01N33/561
• 分類號: G01N33/561;G01N33/12
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種利用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳技術鑒別肉及肉制品中動物源性成份的方法，其特征在于：

(1)肉制品中可溶性蛋白質的提取：稱取去皮肌肉組織，每份2g(2cm×1cm×1cm)左右，共7份，其中一份置于室溫，其余6份分別置于50℃、60℃、70℃、80℃、90℃、100℃恒溫水浴中加熱3min，立即取出放于碾缽中，加入4℃預冷的0.5M?Tris-HCl緩沖液20ml，碾磨勻漿10min，直至溶液呈稀薄狀，轉移1ml處理好的樣品，8000r/min離心15min，吸取100μL離心后的上清液即為可溶性蛋白質。

(2)以可溶性蛋白質為供試樣品，進行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳。

制膠：分離膠濃度為12％，堆積膠濃度為5％，厚度為1mm。

上樣：取20μL供試樣品與5μL5×樣品緩沖液在Eppendorf管中混勻，用微量注射器吸取樣品10μL加入樣品孔底部，避免混入氣泡。

電泳：將電泳槽放置于4℃環境中進行電泳，調節堆積膠電泳電壓為80V，電流為100mA，當樣品呈一條直線，接近分離膠時，將分離膠電泳電壓調至120V，電流100mA，觀察藍色條帶接近于分離膠底部時，停止電泳。

(3)電泳結果檢測：

將膠取出置于培養皿中，加入固定液振蕩30min后，將固定液倒掉并將膠片用蒸餾水沖凈，再加入等量的考馬斯亮藍染色液，搖床振蕩1h后倒掉染色液，加入脫色液，搖床振蕩2h后倒掉脫色液，觀察結果。

(4)樣品鑒定：肉制品中，

由于未經處理樣品蛋白質未發生熱變性的原因，新鮮未經加熱處理的動物肌肉組織的SDS-PAGE圖譜具有條帶分布多的特征，豬、牛、羊、雞、魚的電泳條帶各不相同。根據電泳圖譜可判斷出未經加熱處理的動物肌肉組織的種類。

經過50℃、60℃、70℃、80℃、90℃、100℃處理后樣品的SDS-PAGE圖譜相比新鮮未經處理樣品的SDS-PAGE圖譜，具有以下幾個特點：

經50℃、60℃處理后樣品的SDS-PAGE圖譜與新鮮未經處理樣品比產生輕微差異，表明動物肌肉組織經50℃、60℃處理后有較輕的蛋白質熱變性，其中豬肉樣品分子量約為97.4KD的條帶消失；牛肉和羊肉樣品分子量約為25.4KD和26.3KD的兩條帶消失，大體可判斷消失的兩條條帶為同種物質；雞肉樣品在50℃和60℃之間基本沒有變化；魚肉樣品分子量約為55.8KD和60.7KD兩條帶消失。

經70℃處理后樣品SDS-PAGE圖譜與未處理樣品和50℃及60℃相比產生顯著差異，電泳條帶進一步變少且只在特定分子量處出現條帶，豬肉和羊肉分別具有分子量約為59.8KD、43.0KD、41.6KD、35.9KD、34.8KD的電泳條帶；牛肉與豬肉和羊肉相比，缺少一條分子量約為41.6KD電泳條帶；雞肉電泳條帶仍較多；魚肉有兩條分子量約為30.2KD、29.74KD的電泳條帶。

對于豬、牛、羊肉樣品，經過80℃、90℃、100℃處理后SDS-PAGE圖譜與相應新鮮未經處理樣品差異最大，與相應70℃處理樣品差異明顯，豬肉和牛肉剩下35.9KD、34.8KD的電泳條帶，羊肉分子量為59.8KD的電泳條帶消失；對于雞肉和魚肉樣品，當達到70℃后，溫度升高圖譜不再變化。