[發明專利]一種丙酮丁醇梭菌及其構建方法和用途

有效

• 申請號: 201010162515.3
• 申請日: 2010-05-05
• 公開（公告）號: CN101845413A
• 公開（公告）日: 2010-09-29
• 發明（設計）人: 劉力強;牛昆;賈娟娟;楊明;武芳;閆海榮;范俊輝;邸勝苗;馮文亮;楊麗萍;時蕾;石晨光;王正品
• 申請（專利權）人: 華北制藥集團有限責任公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N15/03;C12P7/16;C12P7/06;C12P7/04;C12R1/145
• 代理公司: 石家莊國域專利商標事務所有限公司 13112
• 代理人: 白海靜

1.一種丙酮丁醇梭菌p1147(CGMCCNo3686)。

2.一種丙酮丁醇梭菌p1147(CGMCCNo3686)的構建方法，其特征在于其由丙酮丁醇梭狀芽孢桿菌ATCC824的原生質體融合篩選而成。

3.根據權利要求2所述的丙酮丁醇梭菌p1147(CGMCCNo3686)的構建方法，其特征在于所述的丙酮丁醇梭狀芽孢桿菌ATCC824的原生質體融合篩選包括以下步驟：

a、原生質體制備

離心收集厭氧培養的ATCC824，使用終濃度為4mg/ml～10mg/ml的溶菌酶酶解30min～40min，55℃～60℃30min～40min加熱致死其原生質體；

b、再生、融合

將a步工序中致死的ATCC824原生質體，加入5～10mlPEG4000～PEG6000，對原生質體誘導融合5～10min，離心收集，加入終濃度為50～60mM的Ca²⁺和75mMMg²⁺溶液，將菌體混勻，均勻涂布于SRA固體平板上，厭氧箱中培養；

c、融合子的篩選

洗下再生的梭菌，取接種到液體梭菌培養基中，35～38℃厭氧培養48h～～72h，離心收集菌體，涂布與玉米平板，37℃厭氧培養3～4d，挑取單菌落至6％淀粉醪糟種子培養基中，37℃培養24h～48h，取1mL轉接8％淀粉發酵培養基，37℃培養48h～72h，選出發酵速度快的丙酮丁醇梭菌p1147(CGMCCNo3686)。

4.根據權利要求3所述的丙酮丁醇梭菌p1147(CGMCCNo3686)的構建方法，其特征在于所述淀粉的培養液為玉米淀粉培養液。

5.根據權利要求4所述的丙酮丁醇梭菌p1147(CGMCCNo3686)的構建方法，其特征在于所述玉米淀粉培養液其玉米淀粉占培養液質量百分含量的7.5％。

6.一種丙酮丁醇梭菌p1147CGMCCNo3686，其可用于發酵產生含有異丙醇的混合醇。

7.根據權利要求6所述丙酮丁醇梭菌p1147CGMCCNo3686用于發酵產生含有異丙醇的混合醇，其特征在于將p1147接種到發酵培養基中，發酵初始菌液濃度為10⁹-10¹¹cfu/mL，于35～40℃，靜止發酵，即可產出含有異丙醇的混合醇。

8.根據權利要求6所述丙酮丁醇梭菌p1147CGMCCNo3686用于發酵產生含有異丙醇的混合醇，其特征在于采用生長至對數期的丙酮丁醇梭菌p1147(CGMCC?No.3686)，按照體積百分含量，以5％的接種量接種到所述發酵培養基中。

9.根據權利要求8所述丙酮丁醇梭菌p1147CGMCCNo3686用于發酵產生含有異丙醇的混合醇，其特征在于所述的發酵溫度為35～40℃，發酵初始pH值5～7，發酵時間為48～72h。

10.根據權利要求8所述丙酮丁醇梭菌p1147CGMCCNo3686用于發酵產生含有異丙醇的混合醇，其特征在于所述的發酵溫度為38℃。發酵周期為72h。