[發明專利]麥芽寡糖基海藻糖水解酶基因序列及其重組蛋白制備方法無效
| 申請號： | 201010161333.4 | 申請日： | 2010-04-30 |
| 公開（公告）號： | CN101880681A | 公開（公告）日： | 2010-11-10 |
| 發明（設計）人： | 茍興華;王衛;李德華;劉達玉;張佳敏;郭秀蘭;唐仁勇;胡海洋 | 申請（專利權）人： | 成都大學 |
| 主分類號： | C12N15/56 | 分類號： | C12N15/56;C12N15/11;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;C12N9/24;C12N15/81;C12R1/84 |
| 代理公司： | 四川省成都市天策商標專利事務所 51213 | 代理人： | 伍孝慈 |
| 地址： | 610106 *** | 國省代碼： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 麥芽 寡糖 海藻 糖水 基因 序列 及其 重組 蛋白 制備 方法 | ||
1.一種人工合成改造的全長麥芽寡糖基海藻糖水解酶(MTHase)基因，其堿基序列如SEQID?NO：4所示。
2.人工合成權利要求1所述全長麥芽寡糖基海藻糖水解酶基因的引物，其序列如SEQ?IDNO：6至SEQ?ID?NO：47所示。
3.含有權利要求1所述基因的表達載體。
4.含有權利要求1所述基因的基因工程菌。
5.含有權利要求1所述基因的細胞系。
6.一種制備麥芽寡糖基海藻糖水解酶的方法，是將權利要求1所述的麥芽寡糖基海藻糖水解酶基因插入畢赤酵母表達載體，轉化宿主菌酵母菌，篩選得到表達麥芽寡糖基海藻糖水解酶基因的基因工程菌，培養該基因工程菌，得到重組表達的麥芽寡糖基海藻糖水解酶。
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：所述畢赤酵母表達載體為pPICZαA。
8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：所述麥芽寡糖基海藻糖水解酶基因插入到pPICZαA載體的XhoI和EcoRI的酶切位點間。
9.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：所述宿主酵母菌為Pichia?pastorisSMD1168H。
10.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：所述麥芽寡糖基海藻糖水解酶基因工程菌為Pichia?pastoris?SMD?1168H/pPICZαA-MTHase。
11.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：所述表達為誘導表達，所用誘導劑為甲醇，誘導濃度為0.5％(v/v)。
12.根據權利要求11所述的方法，其特征在于：所述基因工程菌的培養溫度為30℃，誘導表達的培養溫度為18-25℃。
13.根據權利要求12所述的方法，其特征在于：所述基因工程菌誘導表達的培養溫度為25℃。
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