[發明專利]一種家蠶生物反應器制備人白介素28A的方法及其制藥用途

無效

• 申請號: 201010161096.1
• 申請日: 2010-04-23
• 公開（公告）號: CN101845442A
• 公開（公告）日: 2010-09-29
• 發明（設計）人: 貢成良;陸葉;鄭小堅;薛仁宇;曹廣力
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: C12N15/24
• 分類號: C12N15/24;C12N15/866;C07K14/54;A61K38/20;A61P31/12;A61P35/00;A61P37/02
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 陶海鋒

1.一種家蠶生物反應器制備人白介素28A的方法，其特征在于，通過基因工程方法獲得重組的帶人白介素28A基因的家蠶Bombyx?mori重組桿狀病毒，并用該病毒接種家蠶幼蟲或蛹，使人白介素28A在家蠶幼蟲或蛹中獲得到高效表達。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述重組的帶人白介素28A基因的家蠶Bombyx?mori重組桿狀病毒的制備方法為：

(1)根據GenBank已公開的hIL-28A的cDNA序列(GenBank登錄號：BC113583)，合成hIL-28A基因的編碼序列，克隆進T-載體，獲pUC-hIL-28A質粒；

(2)用BamH?I/EcoR?I雙酶切消化pUC-hIL-28A質?；厥説IL-28A基因片段，用BamH?I/EcoR?I雙酶切消化供體質粒pFastBac-Dual回收pFastBac-Dual片段，將hIL-28A基因片段插入到pFastBac-Dual的BamH?I和EcoR?I之間，將hIL-28A克隆進pFastBac-Dual載體中的桿狀病毒多角體基因啟動子下游獲得pFastBac-Dual-hIL-28A重組質粒；

(3)將pFastBac-Dual-hIL-28A重組質粒轉化大腸桿菌BmDH10Bac感受態細胞，涂布于含四環素、卡那霉素、慶大霉素、IPTG、X-gal的LB瓊脂培養平板上，挑取白色菌落培養，提取重組Bacmid基因組Bacmid-hIL-28A?DNA；

(4)將Bacmid-hIL-28A?DNA由脂質體介導轉染家蠶培養細胞BmN，培養細胞后取上清，獲得重組桿狀病毒BmNPV-hIL-28A。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，采用所述家蠶Bombyxmori重組桿狀病毒接種家蠶幼蟲或蛹的方法為：將重組桿狀病毒BmNPV-hIL-28A感染家蠶培養細胞BmN進行擴增，采用擴增后的重組桿狀病毒BmNPV-hIL-28A接種至五齡家蠶幼蟲或蛹。

4.一種含有人白介素28A的藥物的制備方法，其特征在于，采用權利要求1所述制備方法所得感染重組桿狀病毒的家蠶幼蟲或蛹，經冷凍干燥后制成口服藥物制劑。