[發明專利]一種產β-D-半乳糖苷酶的菌株及用該酶生產低聚半乳糖的方法

有效

• 申請號: 201010160761.5
• 申請日: 2010-04-19
• 公開（公告）號: CN101831389A
• 公開（公告）日: 2010-09-15
• 發明（設計）人: 江波;繆銘;張濤;劇淑君
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12N9/38;C12P19/14;C12R1/645
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.一株產β-D-半乳糖苷酶的菌株，其分類命名為克魯維酵母(Kluyveromycessphaeroides)SK16.001，已保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCCNO：M?2010073。

2.用權利要求1所述的CCTCC?NO：M?2010073菌株發酵生產β-D-半乳糖苷酶的方法，其特征在于步驟為：

(1)種子培養

種子培養基：酵母膏1-10g/L，蛋白胨1-20g/L，葡萄糖1-40g/L，pH5.5-8.0，去離子水配制；

種子培養條件：菌株于28-30℃、100-250rpm的振蕩速度下在種子培養基中培養10-20h活化該菌株；

(2)發酵培養

發酵培養基：酵母膏1-20g/L，蛋白胨1-20g/L，乳糖1-30g/L，pH5.5-8.0；

發酵條件：25-30℃、攪拌速度400-700rpm、空氣流量0.5-1.0vvm的條件下在發酵培養基中發酵10-48h生產β-D-半乳糖苷酶；

(3)發酵后處理

發酵液經冷凍離心后收集濕菌體，用pH7.0的0.1mol/L磷酸鹽緩沖液制成菌懸液，然后菌體細胞破壁提取出β-D-半乳糖苷酶；冷凍離心后，收集的上清液即為粗酶液，經檢測酶活達到2-100U/mL；

所得粗酶液進一步超濾濃縮，或用硫酸銨沉淀蛋白質，離心和冷凍干燥得到β-D-半乳糖苷酶的粗酶粉。

3.用權利要求2所述方法制備的β-D-半乳糖苷酶轉化乳糖生產低聚半乳糖的方法，其特征在于：

向底物乳糖溶液中添加β-D-半乳糖苷酶進行催化轉化生產低聚半乳糖，轉化條件為：乳糖溶液的乳糖質量濃度為20％-80％，酶對底物用量為0.1-30U/g乳糖干基計，pH4.0-8.0，轉化反應溫度為30-50℃，轉化反應時間3-36h，轉化率達30％以上，得到含有低聚半乳糖的酶反應液，進一步加工處理用來制備低聚半乳糖糖漿或低聚半乳糖粉末。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于低聚半乳糖糖漿的制備方法，步驟為：

(1)脫色

在含有低聚半乳糖的酶反應液中添加酶反應液固形物質量含量0.2％-2.0％的活性炭，在50-80℃下溫育10-60min，然后進行硅藻土過濾，取脫色液；

(2)濃縮

將脫色液真空蒸發濃縮至固形物質量含量為20％-70％，即得低聚半乳糖糖漿。

5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于低聚半乳糖粉末的制備方法，步驟為：

(1)脫色

同權利要求4所述脫色步驟；

(2)濃縮

將脫色液真空蒸發濃縮至固形物質量含量為20％-40％的濃縮液；

(3)噴霧干燥

將麥芽糊精與低聚半乳糖濃縮液以固形物含量干基計，按照質量比1∶1-1∶5的比例混合，控制進風溫度170-180℃、出風溫度70-80℃，噴霧干燥，得到含麥芽糊精的低聚半乳糖粉末。