[發明專利]BRAF基因突變檢測特異性引物和液相芯片

有效

• 申請號: 201010160760.0
• 申請日: 2010-04-23
• 公開（公告）號: CN102234684A
• 公開（公告）日: 2011-11-09
• 發明（設計）人: 許嘉森;李國強;余剛;秦會娟
• 申請（專利權）人: 廣州益善生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 萬志香;曾旻輝

1.一種BRAF基因突變檢測液相芯片，其特征是，主要包括有，

(A)針對BRAF的V600E突變位點，分別設計的野生型和突變型ASPE引物對：每種ASPE引物由5’端的tag序列和3’端針對目的基因突變位點的特異性引物組成，所述tag序列選自SEQ?IDNO.25～SEQ?ID?NO.30中的任2條序列；所述特異性引物是來源于SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2或其反向互補序列中的堿基序列，且特異性引物的3’端的最后3位堿基中的一個堿基為突變位點，所述特異性引物的Tm值在52～58℃之間；

(B)分別包被有特異的anti-tag序列的、具有不同顏色編碼的2種微球，所述anti-tag序列選自SEQ?ID?NO.31～SEQ?ID?NO.36中的序列，且所述anti-tag序列能相應地與(A)中所選的tag序列互補配對；

(C)用于擴增具有V600E突變位點的BRAF基因目標序列的擴增引物。

2.根據權利要求1所述的BRAF基因突變檢測液相芯片，其特征是，所述擴增引物為SEQ?IDNO.37和SEQ?ID?NO.38。

3.根據權利要求1所述的BRAF基因突變檢測液相芯片，其特征是，所述野生型的特異性引物為SEQ?ID?NO.3～SEQ?ID?NO.7中的一條，所述突變型的特異性引物為SEQ?ID?NO.8～SEQID?NO.12中的一條；或所述野生型的特異性引物為SEQ?ID?NO.15～SEQ?ID?NO.19中的一條，所述突變型的特異性引物為SEQ?ID?NO.20～SEQ?ID?NO.24中的一條。

4.根據權利要求1-3任一所述的BRAF基因突變檢測液相芯片，其特征是，所述tag序列為SEQID?NO.25和SEQ?ID?NO.26。

5.根據權利要求1-3任一所述的BRAF基因突變檢測液相芯片，其特征是，所述anti-tag序列與微球連接中間還設有間隔臂序列。

6.根據權利要求5任一所述的BRAF基因突變檢測液相芯片，其特征是，所述間隔臂序列為5-10個T。

7.用于BRAF基因V600E突變檢測的特異性引物，其特征是，所述特異性引物是來源于SEQID?NO.1和SEQ?ID?NO.2或其反向互補序列中的堿基序列，且特異性引物的3’端的最后3位堿基中的一個堿基為突變位點，所述特異性引物的Tm值在52～58℃之間。