[發(fā)明專利]一種化合物及其應(yīng)用于單胺氧化酶活性的熒光檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010158059.5
• 申請(qǐng)日: 2010-04-28
• 公開（公告）號(hào): CN101812055A
• 公開（公告）日: 2010-08-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱勍;賈朝;宋明貴
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江工業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C07D405/12
• 分類號(hào): C07D405/12;C07D413/12;C07D417/14;C07D211/74;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 杭州天正專利事務(wù)所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;王兵

(一)技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種新化合物，所述的化合物可以作為熒光探針，應(yīng) 用于單胺氧化酶活性的熒光檢測(cè)方法中。

(二)背景技術(shù)

單胺氧化酶是一類線粒體膜結(jié)合酶，它在大腦和周圍神經(jīng)組織中 催化生物體內(nèi)的胺類化合物，氧化脫氨生成相應(yīng)的醛。研究表明單胺 氧化酶在代謝多巴胺的過程中，伴隨產(chǎn)生自由基和過氧化氫等內(nèi)源性 物質(zhì)，其表達(dá)量的異常與帕金森病和抑郁癥有著極其密切的關(guān)系。此 外測(cè)定分析患者血液中單胺氧化酶活性，對(duì)于急、慢性肝炎，肝硬化 早期診斷具有重要價(jià)值。因此尋找高靈敏度的單胺氧化酶的檢測(cè)方法 具有較大的科研和臨床應(yīng)用價(jià)值。然而目前臨床診斷中所用的熒光試 劑采取非直接法檢測(cè)單胺氧化酶的活性，準(zhǔn)確性不高。

目前有多種方法檢測(cè)單胺氧化酶的活性：紫外法，分光光度法， 放射性法以及熒光法等。前兩種方法的靈敏度不高，而放射性法雖具 有較高的靈敏度，但是它需要放射性標(biāo)記的化合物，操作上有一定的 危險(xiǎn)性。

因此，設(shè)計(jì)出一種更為快速、靈敏、有效的單胺氧化酶的檢測(cè)方 法是相當(dāng)必要和迫切的，而熒光探針作為一種非放射性的標(biāo)記技術(shù)， 因其具有較好的安全性和較高的靈敏度而被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞內(nèi)、外酶 蛋白活性的檢測(cè)。目前雖然有一些通過熒光探針檢測(cè)和分析單胺氧化 酶的方法，但其制備都較為復(fù)雜，缺少一種簡(jiǎn)單、有效的熒光探針檢 測(cè)方法。

(三)發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種單胺氧化酶活性的熒光檢測(cè)方法，方法 所用到的熒光探針是一種新化合物，其制備方法簡(jiǎn)單，性質(zhì)穩(wěn)定，檢 測(cè)的精確度、準(zhǔn)確度高，檢測(cè)速度快。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種如式(I)所示的化合物：

式(I)中，R₂為如式(II)～式(VI)所示的熒光基團(tuán)之一：

式(I)中，R₁為C1～C10的烷基、C2～C10的烯基、C3～C10 的炔基、苯基、芐基或含有下列一個(gè)或兩個(gè)以上取代基的苯基或萘基， 所述的取代基為C1～C5的烷基、鹵素、羧基、硝基、疊氮基、C2～C5 的酯基或C2～C5的烯基；式(IV)或式(VI)中，R₃、R₄或R₅各 自獨(dú)立為H、C1～C6的烷基、鹵素、羧基、硝基、疊氮基、C2～C5 的酯基或C2～C5的烯基。

所述的R₁優(yōu)選為CH₃、C₂H₅、C₃H₅、C₃H₃或芐基。

所述的R₂優(yōu)選如式(II)所示的熒光基團(tuán)。

本發(fā)明還提供所述的如式(I)所示的化合物的制備方法，所述 的方法包括以下步驟：(a)如式C所示的4-鹵代吡啶和鹵代烴R₁X 反應(yīng)，得到式A所示的1-取代-4-鹵代吡啶鹽，所述X為F、Cl、Br 或I，Y為Cl、Br或I；(b)有機(jī)溶劑中，步驟(a)得到的式A所 示的1-取代-4-鹵代吡啶鹽與熒光化合物H-R₂在堿性物質(zhì)的作用下， 反應(yīng)得到式B所示的吡啶類化合物，所述的堿性物質(zhì)為無機(jī)堿性物 質(zhì)或有機(jī)堿性物質(zhì)；(c)步驟(b)得到的式B所示的吡啶類化合物與 硼氫化鈉進(jìn)行還原反應(yīng)得到式(I)所示的化合物；

R₂為如式(II)～式(VI)所示的熒光基團(tuán)之一：

R₁為C1～C10的烷基、C2～C10的烯基、C3～C10的炔基、苯基、 芐基或含有下列一個(gè)或兩個(gè)以上取代基的芳香基，所述的取代基為 C1～C5的烷基、鹵素、羧基、硝基、疊氮基、C2～C5的酯基、C2～C5 的烯基；式(IV)或式(VI)中，R₃、R₄或R₅各自獨(dú)立為H、C1～ C6的烷基、鹵素、羧基、硝基、疊氮基、C2～C5的酯基或C2～C5的 烯基。