[發明專利]一種抗血栓的重組巴曲酶凍干制劑

有效

• 申請號: 201010157785.5
• 申請日: 2010-04-28
• 公開（公告）號: CN102258483A
• 公開（公告）日: 2011-11-30
• 發明（設計）人: 薛百忠;王宏英;薛雁;徐梅;王建華;姜大威;楊宇;孟威;段威
• 申請（專利權）人: 沈陽守正生物技術有限公司
• 主分類號: A61K9/19
• 分類號: A61K9/19;A61K38/48;C12N1/19;C12N9/60;C12N15/81;A61P7/02;C12R1/84
• 代理公司: 沈陽晨創科技專利代理有限責任公司 21001
• 代理人: 張晨

技術領域

本發明涉及抗血栓藥物，特別提供一種抗血栓的重組巴曲酶凍干制劑。

背景技術：

隨著血栓栓塞性疾病患者的增加，抗血栓藥物的研制已成為熱點之一，人們一方面采用分子生物學技術對現有藥物進行分子結構改造，以期獲得更為優良的溶栓藥物。另一方面，積極的尋找一些安全性好、療效好、副作用小的天然來源的溶栓藥物。

蛇毒是含有多種生物活性蛋白和多肽的混合物，含有多種抗栓成分。自20世紀60年代，人們陸續開發了一些具有抗栓作用的蛇毒制劑：1976年Esnouf從馬來西亞紅口蝮蛇毒中純化出凝血酶樣酶或稱類凝血酶(Thrombin-likeEnzymes?TLEs)，制成了第一個治療血栓病的蛇毒制劑Ancord。迄今為止，已從蛇毒中分離出多種溶栓物質，部分已用于臨床。如東菱克栓酶、降纖酶及蘄蛇酶等，獲得了較好的臨床療效。

目前從蛇毒中分離的抗栓物質根據其作用機制、分子結構等的不同，分為類凝血酶、纖溶酶及纖溶酶原激活劑等幾大類。

自1936年奧地利學者Von?Klobusitzky首次從巴西矛頭蝮蛇(Bothropsatrox)毒液中分離得到一種絲氨酸蛋白水解酶(類凝血酶)，也就是所說的巴曲酶。至今已發現30多種蛇毒中含有類凝血酶組份，并有20多種先后得到分離和純化。

我國目前臨床上應用的蛇毒制劑大部分為類凝血酶，如東菱克栓酶、蘄蛇酶及降纖酶等。在臨床上有兩方面的用途。

一為降纖作用，即巴曲克栓酶，如東菱迪芙(來自于Bothrops?moojeni)，其作用是分解纖維蛋白原，抑制血栓形成；誘發組織型纖維蛋白溶解酶原激活劑(t-pa)的釋放，減弱纖維蛋白溶解酶原激活劑的抑制因子的活性，促使纖維蛋白溶解；增加血液流動性，防止血栓形成；降低血管阻力，加快血液流速，改善微循環。主要用于腦梗塞、血栓閉塞性脈管炎、股動脈栓塞、肺栓塞等血管栓塞性疾病。目前，巴曲克栓酶注射液在臨床上已廣泛用于多種疾病的治療，包括缺血性腦血管病、急性心肌梗塞、突發性耳聾、急性腦梗塞、難治性腎病綜合癥、糖尿病性周圍神經病、肺源性心臟病、不穩定心絞痛、高粘血癥、心源性腦栓塞，其療效確切，不良反應輕微。

二為止血作用，即巴曲止血酶，如立止血，也稱蛇毒血凝酶(來自于Bothrops?atrox)，可用于多種原因引起的出血，特別是應用于傳統止血藥無效的出血病人，療效確切，未發現明顯的不良反應。

類凝血酶對纖維蛋白原的作用較凝血酶更為專一，大部分蛇毒類凝血酶僅裂解纖維蛋白肽A，部分還同時裂解B肽。類凝血酶不會激活F?X?III，所產生的纖維蛋白聚合物分子間只在頭尾連接。因此，不能使纖維蛋白發生交聯，不交聯的纖維蛋白對體內的纖溶酶較敏感，易受其分解，降解為無活性的小肽，在體內可迅速的被網狀內皮系統及腎臟清除，從而使纖維蛋白原濃度下降，出現抗凝效果。在體內，類凝血酶則可以消耗纖維蛋白原，降低血液粘度，從血流變學方面改善微循環，從而起到抗栓的作用。而多數的類凝血酶不激活血小板，也不激發血小板的釋放反應，亦不引起血塊收縮，僅少數在高濃度下引起血小板的聚集，有的TLEs還可阻止凝血酶誘導的血小板聚集效應，同時對由ADP-Na、膠原及腎上腺素等血小板聚集誘導劑所誘導的血小板聚集有同樣的抑制效應。這些可能是類凝血酶防治血栓癥的另一重要藥理學基礎。

蛇毒類凝血酶現已廣泛應用于臨床，并取得明顯的臨床效果，但仍有很多問題未解決：一是蛇毒類凝血酶制劑作為一種生物制品，存在抗原性，偶有過敏反應出現，且多次應用后易產生相應的抗體，從而降低制劑的療效；二是蛇毒的來源有限，不利于大規模生產，同時價格較高，不利于其廣泛應用；三是類凝血酶是從蛇毒中純化得到的，純度難以控制，從而增加了毒副作用。解決這些問題的辦法是借助基因重組技術，在實驗室中進行表達，但這些必須在對蛇毒類凝血酶的結構及性質作更深入的研究后方可進行。

成熟的巴曲酶分子是由231個氨基酸殘基組成的單鏈蛋白，其氨基酸序列如下：

1???VIGGDECDIN?EHPFLAFMYY?SPRYFCGMTL?INQEWVLTAA

41??HCNRRFMRIH?LGKHAGSVAN?YDEVVRYPKE?KFICPNKKKN

81??VITDKDIMLI?RLDIPVKNSE?HIAPLSLPSN?PPSVGSVCRI

121?MGWGAITTSE?DTYPDVPHCA?NINLFNNTVC?REAYNGLPAK

161?TLCAGVLQGG?IDTCGGDSGG?PLICNGQFQG?ILSWGSDPCA