[發(fā)明專利]一種抗血栓的重組巴曲酶凍干制劑有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201010157785.5 | 申請日： | 2010-04-28 |
| 公開（公告）號： | CN102258483A | 公開（公告）日： | 2011-11-30 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 薛百忠;王宏英;薛雁;徐梅;王建華;姜大威;楊宇;孟威;段威 | 申請（專利權(quán)）人： | 沈陽守正生物技術(shù)有限公司 |
| 主分類號： | A61K9/19 | 分類號： | A61K9/19;A61K38/48;C12N1/19;C12N9/60;C12N15/81;A61P7/02;C12R1/84 |
| 代理公司： | 沈陽晨創(chuàng)科技專利代理有限責任公司 21001 | 代理人： | 張晨 |
| 地址： | 110015 遼寧省沈*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 血栓 重組 巴曲酶凍干 制劑 | ||
1.一種抗血栓的重組巴曲酶凍干制劑，其特征在于：該制劑含有重組定點突變巴曲酶、賦形劑以及凍干保護劑，其比例為，巴曲酶∶賦形劑∶保護劑＝10BU∶10～100mg∶0.1～5mg；
其中重組定點突變巴曲酶的氨基酸序列相對于天然的巴曲酶氨基酸序列的第45位的Arg突變?yōu)長ys，具體為：
1????VIGGDECDIN??EHPFLAFMYY??SPRYFCGMTL??INQEWVLTAA
41???HCNRKFMRIH??LGKHAGSVAN??YDEVVRYPKE??KFICPNKKKN
81???VITDKDIMLI??RLDIPVKNSE??HIAPLSLPSN??PPSVGSVCRI
121??MGWGAITTSE??DTYPDVPHCA??NINLFNNTVC??REAYNGLPAK
161??TLCAGVLQGG??IDTCGGDSGG??PLICNGQFQG??ILSWGSDPCA
201??EPRKPAFYTK??VFDYLPWIQS??IIAGNKTATC??P
2.按照權(quán)利要求1所述抗血栓的重組巴曲酶凍干制劑，其特征在于：巴曲酶∶賦形劑∶保護劑＝10BU∶30～70mg∶1～4mg。
3.按照權(quán)利要求1所述抗血栓的重組巴曲酶凍干制劑，其特征在于，所述重組定點突變巴曲酶，通過將人工合成的定點突變的巴曲酶結(jié)構(gòu)基因在酵母菌中，以分泌表達的方式大量產(chǎn)生獲得。
4.按照權(quán)利要求3所述重組定點突變巴曲酶，其特征在于，所述酵母菌為甲醇酵母菌。
5.按照權(quán)利要求4所述重組定點突變巴曲酶，其特征在于：在甲醇酵母菌中實現(xiàn)分泌表達時，依據(jù)巴曲酶的天然氨基酸序列，選擇甲醇酵母菌比較偏好的密碼子，人工合成定點突變的巴曲酶結(jié)構(gòu)基因序列。
6.按照權(quán)利要求5所述重組定點突變巴曲酶，其特征在于：在甲醇酵母菌中實現(xiàn)分泌表達時，將人工合成的定點突變的巴曲酶結(jié)構(gòu)基因插入到甲醇酵母菌表達載體pPICZα中。
7.按照權(quán)利要求4所述重組定點突變巴曲酶，其特征在于：在甲醇酵母菌中實現(xiàn)分泌表達時，利用酵母菌的α-信號肽，將巴曲酶移出細胞，其中在信號肽序列與巴曲酶蛋白序列之間插入KEX2蛋白酶識別序列。
8.按照權(quán)利要求1所述抗血栓的重組巴曲酶凍干制劑，其特征在于：重組定點突變巴曲酶經(jīng)高密度發(fā)酵甲醇誘導表達，親和、離子交換、疏水、凝膠等層析純化，制成凍干制劑。
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