[發明專利]一種抗血栓的重組巴曲酶凍干制劑

有效

• 申請號: 201010157785.5
• 申請日: 2010-04-28
• 公開（公告）號: CN102258483A
• 公開（公告）日: 2011-11-30
• 發明（設計）人: 薛百忠;王宏英;薛雁;徐梅;王建華;姜大威;楊宇;孟威;段威
• 申請（專利權）人: 沈陽守正生物技術有限公司
• 主分類號: A61K9/19
• 分類號: A61K9/19;A61K38/48;C12N1/19;C12N9/60;C12N15/81;A61P7/02;C12R1/84
• 代理公司: 沈陽晨創科技專利代理有限責任公司 21001
• 代理人: 張晨

1.一種抗血栓的重組巴曲酶凍干制劑，其特征在于：該制劑含有重組定點突變巴曲酶、賦形劑以及凍干保護劑，其比例為，巴曲酶∶賦形劑∶保護劑＝10BU∶10～100mg∶0.1～5mg；

其中重組定點突變巴曲酶的氨基酸序列相對于天然的巴曲酶氨基酸序列的第45位的Arg突變為Lys，具體為：

1????VIGGDECDIN??EHPFLAFMYY??SPRYFCGMTL??INQEWVLTAA

41???HCNRKFMRIH??LGKHAGSVAN??YDEVVRYPKE??KFICPNKKKN

81???VITDKDIMLI??RLDIPVKNSE??HIAPLSLPSN??PPSVGSVCRI

121??MGWGAITTSE??DTYPDVPHCA??NINLFNNTVC??REAYNGLPAK

161??TLCAGVLQGG??IDTCGGDSGG??PLICNGQFQG??ILSWGSDPCA

201??EPRKPAFYTK??VFDYLPWIQS??IIAGNKTATC??P

2.按照權利要求1所述抗血栓的重組巴曲酶凍干制劑，其特征在于：巴曲酶∶賦形劑∶保護劑＝10BU∶30～70mg∶1～4mg。

3.按照權利要求1所述抗血栓的重組巴曲酶凍干制劑，其特征在于，所述重組定點突變巴曲酶，通過將人工合成的定點突變的巴曲酶結構基因在酵母菌中，以分泌表達的方式大量產生獲得。

4.按照權利要求3所述重組定點突變巴曲酶，其特征在于，所述酵母菌為甲醇酵母菌。

5.按照權利要求4所述重組定點突變巴曲酶，其特征在于：在甲醇酵母菌中實現分泌表達時，依據巴曲酶的天然氨基酸序列，選擇甲醇酵母菌比較偏好的密碼子，人工合成定點突變的巴曲酶結構基因序列。

6.按照權利要求5所述重組定點突變巴曲酶，其特征在于：在甲醇酵母菌中實現分泌表達時，將人工合成的定點突變的巴曲酶結構基因插入到甲醇酵母菌表達載體pPICZα中。

7.按照權利要求4所述重組定點突變巴曲酶，其特征在于：在甲醇酵母菌中實現分泌表達時，利用酵母菌的α-信號肽，將巴曲酶移出細胞，其中在信號肽序列與巴曲酶蛋白序列之間插入KEX2蛋白酶識別序列。

8.按照權利要求1所述抗血栓的重組巴曲酶凍干制劑，其特征在于：重組定點突變巴曲酶經高密度發酵甲醇誘導表達，親和、離子交換、疏水、凝膠等層析純化，制成凍干制劑。