[發明專利]一種抗雙酚A單克隆抗體的制備方法

無效

• 申請號: 201010157470.0
• 申請日: 2010-04-21
• 公開（公告）號: CN101863981A
• 公開（公告）日: 2010-10-20
• 發明（設計）人: 趙肅清;黃洪;張磊;張焜;李明月;鄭杰;方巖雄;黃寶華
• 申請（專利權）人: 廣東工業大學
• 主分類號: C07K16/44
• 分類號: C07K16/44;C07K14/765;C12N5/20;G01N33/577
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 林麗明

技術領域

本發明是一種針對環境激素雙酚A的單克隆抗體的制備方法，屬于檢測技術領域。

背景技術

雙酚A(Biphenol?A)，簡稱BPA，為2，2-雙(4-羥基苯基)丙烷，結晶或白色鱗片，微有酚的氣味。溶于堿溶液、乙醇、丙酮、乙酸、乙醚和苯，微溶于四氯化碳，幾乎不溶于水。雙酚A是由苯酚、丙酮在酸性介質中合成的，被廣泛應用于飲料容器、餐具、嬰兒奶瓶、奶嘴的生產以及作為牙齒密封劑、牙科填充劑的原料之一，是制造染料、機械儀表及醫療器械、罐頭內包裝、食品包裝材料等的重要化工原料，在工業生產和人們的日常生活中用途廣泛，應用非常普遍。

雙酚A屬于環境雌激素物質，在體內通過與雌激素受體結合或影響細胞信號傳導途徑等其它方式模仿或干擾內源雌激素作用，發揮雌激素樣效應，對人的皮膚、呼吸道、消化道和角膜有刺激性。當體內的雙酚A達到一定量時就會破壞肝細胞和腎細胞，造成慢性中毒，使人出現不同程度的頭昏、頭痛、皮疹、精神不安、腹瀉等癥狀。

近年來由于大量含雙酚A的產品進入人們的日常生活，特別是食用碳酸酯包裝材料和廣泛用于食品罐頭金屬容器和瓶蓋環氧樹脂涂層中的雙酚A會溶入水中，直接進入人體，危害人類健康。國內外對市場產品的檢測情況報道發現，聚碳酸酯水杯、奶瓶、奶嘴、桶裝水(瓶)都含有雙酚A。美國康涅狄格州和芝加哥市已經批準雙酚A禁令：從2011年10月1日起，任何人不得在康涅狄格州生產、銷售或分銷以下產品：儲存在含雙酚A的塑料容器、瓶或罐中的嬰幼兒配方乳或嬰幼兒食品。歐盟、美國和日本都對雙酚A建立了相關檢測標準，其中，歐盟和美國的限量要求為0.6mg/kg，日本則規定雙酚A的總溶出量不超過2.5μg/mL。目前，我國國家質量監督檢驗檢疫總局已經開展對規定時間段內全國進出口聚碳酸酯類和環氧樹脂類及其他相關的食品接觸產品實施抽樣檢測實驗室雙酚A遷移量及游離酚等的專項普查活動。簽于此，及時監測雙酚A在水體中的溶出量顯得尤為必要，同時，對雙酚A檢測方法的精度和效率也提出了很高的要求。

對于微量的雙酚A的檢測方法國內外有很多報道，主要包括紫外分光光度法、雙波長分光光度法、氣相色譜(GC)法、氣相色譜-質譜(GC/MS)法、高效液相色譜(HPLC)法、高效液相色譜-紫外法(HPLC/UV)、液相色譜-質譜(LC/MS)法、反相液相色譜法、示波極譜法及熒光測定方法，這些方法雖然能對雙酚A進行準確檢測，但需要大型儀器設備、繁瑣的樣品前處理和特殊的條件，不適應現場測定。因此，出于常見生活制品可能含有雙酚A的潛在危害性，建立快速適應現場并方便廣大消費者可使用的檢測方法是解決雙酚A不安全事件的關鍵。

免疫學檢測方法因其靈敏度高、特異性強、快速、經濟等優點，非常適合雙酚A殘留的篩選檢測。1971年，瑞典學者Engvail和Perlmann、荷蘭學者Van?Weerman和Schuurs分別報道將免疫技術發展為檢測體液中微量物質的固相免疫測定方法，稱為酶聯免疫吸附實驗(enzyme?linked?immunosorbent?assay，ELISA)。ELISA測定靈敏、特異、操作簡單、易于自動化、無放射性污染，且易與其他相關技術偶聯，因此使其成為目前應用最廣而且發展最快的一種免疫測定技術。

目前，國內外有關于雙酚A免疫檢測研究的報道，而國內僅有的報道是用抗血清制成的雙酚A多克隆抗體，沒有雙酚A單克隆抗體制備成功的報道。由于多克隆抗體特異性差，存在交叉反應，難以滿足對雙酚A微量進行監控分析的需要，因此如果能篩選到分泌雙酚A抗體的單克隆細胞株，大量制備出雙酚A的單克隆抗體，建立雙酚A的免疫分析方法，則可以更有效的對雙酚A進行監控，實現雙酚A的快速、特異、靈敏的現場檢測。

發明內容

本發明的目的是提供一種雙酚A單克隆抗體的制備方法，以雙酚A為研究對象，通過合成雙酚A人工抗原制備雙酚A的單克隆抗體，建立檢測雙酚A的酶聯免疫試驗，用于雙酚A的快速檢測。

技術方案：